题目内容
【题目】农杆菌侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA插入到植物基因组中。图示为利用农杆菌培育转基因植物的基本流程，请据图作答：
（1）剪除Ti质粒的某些片段、替换复制原点O与添加抗生素的抗性基因T的过程①中，需用___________________处理DNA以防止DNA片段的自身环化，需用___________________ “缝合”双链DNA片段的平末端。
（2）目的基因是指编码蛋白质的结构基因和一些____________________。由过程②形成的运载体中，目的基因的首端具有___________________识别和结合的部位。
（3）过程③常用_______ 处理使农杆菌成为感受态细胞。在过程⑤⑥前，常采用________________技术检测农杆菌和愈伤组织细胞中是否有目的基因及转录产物。
（4）过程④需对植物细胞做冲洗和_______ 处理，然后用________________去除细胞壁。
【答案】（1）多种限制酶 T4DNA连接酶
（2）具调控作用的因子 RNA聚合酶
（3）Ca2+（CaCl2溶液） 核酸分子杂交（基因探针）
（4）消毒 纤维素酶（和果胶酶）
【解析】
试题分析：（1）防止DNA片段的自身环化，需用多种限制酶处理DNA，以形成不同的黏性末端；用T4DNA连接酶“缝合”双链DNA片段的平末端。
（2）目的基因是指编码蛋白质的结构基因和一些具调控作用的因子。过程②为构建基因表达载体，构建的基因表达载体中，启动子位于目的基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位。
（3）过程③是将表达载体导入农杆菌细胞，常用Ca2+（CaCl2溶液）处理使农杆菌成为感受态细胞。检测农杆菌和愈伤组织细胞中是否有目的基因常采用DNA分子杂交技术，检测农杆菌和愈伤组织细胞中是否有目的基因的转录产物常采用分子杂交技术。
（4）过程④表示从植物组织中获取原生质体，需对植物细胞做冲洗和消毒处理，以避免杂菌污染；然后用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁。
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