Question

【题目】基因敲除技术是指通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。基因敲除技术常用于建立某种特定基因缺失的生物模型。例如，基因敲除模式小鼠制备技术图解如下：

请回答：

（1）图中ES细胞（胚胎干细胞）存在囊胚的_______部位，它具有体积小、细胞核大、____________的特点。

（2）neor(新霉素抗性基因)位于基因表达载体的________和_________之间。

（3）转染ES细胞过程既可采用电穿孔法，亦可采用_________法。

（4）筛选中靶ES细胞需在动物细胞培养液中添加_____，图中字母X过程采用_____技术。

（5）嵌合鼠和白色纯合体小鼠交配产生的后代有___种表现型，其中黑色鼠是被破坏基因X的_____（填“纯合体”或“杂合体”）。

Answer 1

【答案】内细胞团 核仁明显 启动子 终止子 显微注射法 新霉素 胚胎移植 2 杂合体

【解析】

囊胚包括内细胞团和滋养层，其中内细胞团细胞，具有发育的全能性，属于胚胎干细胞，具有体积小、细胞核大、核仁明显的特点。

基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质抗原抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）图中ES细胞（胚胎干细胞）存在囊胚的内细胞团部位，它具有体积小、细胞核大、核仁明显的特点。

（2）neor(新霉素抗性基因)位于基因表达载体的启动子和终止子之间。

（3）转染ES细胞过程既可采用电穿孔法，亦可采用显微注射法。

（4）筛选中靶ES细胞需在动物细胞培养液中添加新霉素，图中字母X表示将胚胎移入代孕母鼠，该过程采用胚胎移植技术。

（5）嵌合鼠和白色纯合体小鼠交配产生的后代有2种表现型，其中黑色鼠是被破坏基因X的杂合体。