题目内容
【题目】P450是石油降解的关键酶。用SalI和NdeI联合酶切获得P450基因，与甲图所示的质粒重组后，导入大肠杆菌中获得基因工程菌。甲图中mel基因表达能使白色菌落变成黑色，aacCI是庆大霉素（抗生素）抗性基因。甲图中箭头位置是不同限制酶的切割位点，乙图表示几种限制酶对应的识别序列及切割位点。回答下列问题：
(l)甲图所示质粒中没有Sal I酶的切割位点，切割质粒时可用乙图中的____酶代替，原因是____。酶切后的质粒与目的基因（P450基因）在____酶的作用下形成重组质粒。
(2)经测定图甲质粒长度为7.6kb(lkb为1000个碱基对)，重组质粒经Nde I、SspI联合酶切后获得了6．0kb和1.2kb的两个片段，据此推测，目的基因的长度应为____kb。基因表达载体中必须含有启动子，它的作用是____。
(3)将重组质粒导人大肠杆菌时，常用Ca2+处理大肠杆菌，使细胞处于一种____的生理状态，这种细胞称为感受态细胞。由于重组质粒导入受体细胞的成功率很低，需要接种到含有_____的固体培养基上，选择颜色为____的菌落扩大培养，进而筛选出所需的工程菌。
【答案】Xho I Sal I和XhoI作用于原质粒所产生的粘性末端相同 DNA连接 1.4 RNA聚合酶识别并结合位点 能吸收周围环境中DNA分子 庆大霉素 白色
【解析】
本题考查基因工程，考查对限制酶作用、基因工程操作步骤的理解。根据图甲中标记基因位置和图乙中各种限制酶切点可判断目的基因的插入位置，根据标记基因是否表达可筛选含有重组质粒的受体细胞。
(l)甲图所示质粒中没有SalI酶的切割位点，切割质粒时可用乙图中的Xho I酶代替，二者作用后可形成相同的黏性末端。酶切后的质粒与目的基因（P450基因）可在DNA连接酶的作用下形成重组质粒。
(2)图甲质粒长度为7.6kb(lkb为1000个碱基对)，据图甲可知，用Xho I和NdeI联合酶切处理质粒，去除的片段应为1.8kb，剩余的DNA片段为5.8kb，重组质粒经Nde I、SspI联合酶切后获得了6．0kb和1.2kb的两个片段，说明重组质粒长度为6.0+1.2=7.2kb，则目的基因的长度应为7.2—5.8=1.4kb。基因表达载体中启动子是RNA聚合酶的结合部位，可以启动转录过程。
(3)将重组质粒导人大肠杆菌时，常用Ca2+处理大肠杆菌，使细胞壁的通透性增大，使之容易吸收周围环境中DNA分子。据图可知，目的基因的插入会破坏mel基因，但不会破坏庆大霉素（抗生素）抗性基因，因此可将受体细胞接种到含有庆大霉素的固体培养基上，含有重组质粒的大肠杆菌形成的菌落不会变成黑色，但具有庆大霉素抗性，选择颜色为白色的菌落扩大培养，可筛选出所需的工程菌。
第1卷单元月考期中期末系列答案
