题目内容
【题目】回答下列第(一）、（二)小题：
(一)耐高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性。如图表示从热泉的嗜热菌样品中进行筛选分离菌种，经过耐高温淀粉酶的提纯和固定化后，用于工业化生产的过程。请回答：
（1）①过程进行的操作为________________，②过程实施的是_______________分离法；可根据Ⅰ号培养基上________的大小，来确定需扩大培养的目标菌种。
（2）Ⅰ号培养基中除了加入淀粉外，还需加人另一种重要的营养成分是_________(A.琼脂B.葡萄糖C.硝酸铵D.碳酸氢钠），并放在高温条件下培养。
（3）将适量经提纯的耐高温淀粉酶通过_______法固定在石英砂上，形成固定化酶柱，此后用一定浓度的淀粉溶液进行过柱试验，可往流出液中滴加______溶液检测酶的催化效果，但结果发现流出液显蓝色，请分析在上述操作中存在的可能原因是_______(至少写出两点）。
(二)通过转基因技术培育出乳汁中含人β-酪蛋白的山羊，其流程如下图。回答有关问题。
（1）基因工程的核心是图中的__________(用图中数字回答）过程；如果要利用人类基因组构建含β-酪蛋白因的基因文库，该过程______(填“需要”或“不需要”）限制性核酸内切酶参与。若要检测乳汁中是否出现人β-酪蛋白，可用的检测物质是________(填“人β-酪蛋白基因”或“人β-酪蛋白抗体”）。
（2）②过裎一般是通过_________法实现的。当形成转基因受精卵后，需要经过一段时间的体外培养，这一过程中不需要的措施是___________(A.培养液中加入动物血清 B.培养液要及时更换成分 C.加入饲养层细胞 D.放在C02培养箱中）。
（3）③过程的实现必须通过________技术；通过④过程实现转基因山羊的克隆繁殖，要通过______技术形成重组细胞后，再经胚胎工程实现。
【答案】 稀释 涂布 菌落周围透明圈 C 吸附 KI-I2 固定化操作后未用蒸馏水洗涤；要取反应一段时间后的流出液进行显色反应；液体过柱的流速过快等 ① 需要 人β-酪蛋白抗体 显微注射 C 胚胎移植 核移植
【解析】试题分析：据题（一）图分析，①过程是梯度稀释，②过程是稀释涂布平板法接种，目的是筛选单菌落；从功能上看，Ⅰ号培养基属于选择培养基，从物理状态上来说，Ⅱ号培养基属于固体培养基；采用的接种方法有稀释涂布平板法和平板划线法；常用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌和干热灭菌。根据题（二）图分析，①表示基因表达载体的构建，②表示将目的基因导入受体细胞，③表示胚胎移植过程，④表示胚胎分割移植。
（一）（1）根据以上分析已知，①过程为梯度稀释，②过程的接种方法为稀释涂布平板法；部分嗜热菌在Ⅰ培养基上生长时可产生淀粉酶，分解培养基中的淀粉后会在菌落周围形成透明圈，透明圈越大，说明产生的淀粉酶越多，应挑选透明圈大的菌落接种的Ⅱ号培养基上继续培养。
（2）在培养微生物的培养基中，碳源和氮源必不可少，所以除淀粉外还应加入硝酸铵作为氮源。
（3）由于酶分子较小，因此固定化酶一般用吸附法；固定化酶催化淀粉水解后流出的液体应该不含淀粉，可往流出液中滴加KI-I2溶液检测酶的催化效果；若发现流出液显蓝色，在上述操作中存在的可能原因是：固定化操作后未用蒸馏水洗涤；要取反应一段时间后的流出液进行显色反应；液体过柱的流速过快等。
（二）（1）基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建，即图中①过程；如果要利用人类基因组构建含β-酪蛋白因的基因文库，该过程需要限制性核酸内切酶参与；若要检测乳汁中是否出现人β-酪蛋白，可用抗原-抗体杂交法，因此可用的检测物质是人β-酪蛋白抗体。
（2）②表示将目的基因导入受体细胞，一般用显微注射法；受精卵培养过程中，培养液中加入动物血清并及时更换成分，AB正确；不需要进入饲养层细胞，C错误；动物细胞培养需要放入C02培养箱中，D正确。
（3）③表示胚胎移植过程；④过程实现转基因山羊的克隆繁殖，要通过核移植技术形成重组细胞后，再经胚胎工程实现。
