Question

【题目】油菜的株高由等位基因G和g决定，GG为高杆，Gg为中杆，gg为矮杆。B基因是另一种植物的高杆基因，它与G基因在油菜的株高时有相同的效果，株高与这两个基因的数量正相关，将B基因导入油菜可培育出转基因油菜。请回答下列问题：

（1）图一表示含有目的基因的B的DNA片段和部分碱基序列，图二表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspI、BamHI、MboI、SmaI 4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGC、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。若需将目的基因B导入图二中的质粒，应选择的限制酶是 ；为了筛选出含重组质粒的受体细胞，培养基上需要分别添加 。

（2）所用的质粒是双链闭合环状的DNA分子，若用两种识别切割序列完全不同的限制酶M和N切割，通过凝胶电泳分离分析得下表。限制酶M和N的识别序列和切割位点如图三所示。

①该质粒的长度为 kb。在该质粒中，M酶与N酶的切割位点分别有 个。

②M酶与N酶切出的能相互粘连的末端在酶的作用下相互连接，连接后的序列 （填“可以”或“不可以”）用M酶、N酶进行切割。

（3）若将一个B基因转移到矮杆油菜的染色体上，且B基因与g基因位于非同源染色体上，并在植株中得到成功表达，可观察到转基因油菜植株表现型为 。从基因工程的操作步骤上看，这属于在

水平上来鉴定检测重组性状的表达。

（4）若将一个B基因转移到中杆油菜的染色体上并在植株中得到成功表达，培育了甲～丁四种转基因油菜（如图四），其中与甲的株高相同的是 。

Answer 1

【答案】（1）BamHI 抗生素B和抗生素A

（2）①16 3、2 ②不可以

（3）中杆 个体生物学

（4）乙和丁

【解析】

试题分析：（1）在构建重组质粒时，目的基因D不能用限制酶MspⅠ和SmaⅠ，这两种限制酶切割的位点在目的基因的中间，如果切割目的基因D会被破坏；也不能用限制酶MboⅠ，它在目的基因上有两个酶切位点，如果切割质粒上的标记基因会被破坏，就没办法进行重组质粒的检测，故应选用限制酶BamHⅠ；用限制酶BamHⅠ切割质粒会破坏抗生素A抗性基因，保留抗生素B抗性基因，则导入重组质粒的大肠杆菌能再含有抗生素B的培养基上生存，但不能在含有抗生素A的培养基上生存。所以为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，在培养基中分别添加抗生素A、抗生素B，筛选出能在抗生素B中生长而不能再抗生素A中生长的大肠杆菌。

（2）①表格中+表示该片段的存在以及含量，用酶M切割产生了一个1．0kb的、一个5．0kb的、一个10．0kb的片段，因此则该DNA的长度为16Kb。由于质粒为环状DNA，用酶M得到3个片段，则有3个切点，用酶N得到2个片段，则有2个切点。

②M酶和N酶切割能得到相同的黏性末端，可以用DNA连接酶催化连接当连接后，没有了两种酶的识别序列，因此两种酶不能再切割。

（3）矮杆油菜成功导入一个B基因后，其基因型为ggBb，根据题干信息“B基因与G基因在油菜的株高上有相同的效果”可知，这样的转基因油菜表现为中杆。从基因工程的操作步骤上看，这属于在个体生物学水平上来鉴定检测重组性状的表达。

（4）B基因与G基因在油菜的株高上有相同的效果，并且株高与这两个基因的数量正相关。甲植株含有两个有效显性基因；乙植株含有2个有效显性基因；丙中B基因的插入导致G基因被破坏，因此丙植株只有一个有效显性基因；丁植株含有2个显性基因．所以与甲的株高相同的是乙和丁。