Question

【题目】血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O2或CO2的运输。请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题：

（1）将实验流程补充完整：A为________________，B为____________________。

（2）洗涤红细胞的目的是去除__________，达到该目的的关键是控制离心的____________________。

（3）将收集的血红蛋白溶液放在透析袋中进行透析，透析的原理是：_________。

（4）凝胶色谱法是根据________________________而达到蛋白质分离的有效方法。

（5）在装填凝胶柱时，不得有气泡存在，是因为气泡会____________________，降低分离效果。

（6）在洗脱过程中加入物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液（pH为7.0）的目的是__________。

（7）分离纯化好的血红蛋白，需要进行纯度鉴定，在鉴定方法中，使用最多的是_________________。

Answer 1

【答案】血红蛋白的释放 样品的加入和洗脱 杂蛋白(血浆蛋白) 速度和时间 透析袋能使小分子自由进出，而大分子则保留在袋内 相对分子质量的大小 搅乱洗脱液中蛋白质洗脱的次序 准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的pH和体内的一致 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

【解析】

蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。样品处理包括红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液。凝胶色谱操作包括:凝胶色谱柱的制作、凝胶色谱柱的装填、样品的加入和洗脱。据此分析题图可知：A为血红蛋白的释放，B为样品的加入和洗脱。

(1) 样品处理包括红细胞的洗涤、图中A所示的血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液。凝胶色谱操作包括:凝胶色谱柱的制作、凝胶色谱柱的装填、图中B所示的样品的加入和洗脱。

(2) 洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白(血浆蛋白)，以利于后续步聚的分离纯化。若离心速度过高和时间过长，会使白细胞等一同沉淀，得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度，因此达到该目的的关键是控制离心的速度和时间。

(3) 透析袋一般是用硝酸纤维素制成的，透析的原理是：透析袋能使小分子自由进出，而将大分子则保留在袋内。

(4) 凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小来分离蛋白质的有效方法。

(5) 在装填凝胶柱时，若产生气泡，则其会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，从而影响分离效果，所以在装填凝胶柱时，不得有气泡存在。

(6) 在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH值的影响，维持pH值基本不变，所以在洗脱过程中加入物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液(pH为7.0)的目的是：准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的pH和体内的一致。

(7) 琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳是两种常用的电泳方法。在对分离纯化好的血红蛋白进行纯度鉴定时，使用最多的是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。