Question

【题目】某研究小组对自来水和污染河水水样中的大肠杆菌含量进行了测定。回答下列问题：

（1）检测自来水中大肠杆菌的数量，可选用伊红美蓝培养基。该培养基除了为大肠杆菌的生长、繁殖提供水和氮源外，还要提供__________________（答出两点）等基本营养成分；制备该培养基时应在灭菌之____（填“前”或“后”）调整pH至7.6，以满足大肠杆菌生长的要求；该培养基中加入伊红美蓝的作用是______________________________。

（2）研究小组使用“滤膜法”对污染严重的河流水体进行大肠杆菌活菌数的测定，需将水样进行适当稀释，如取水样1mL加入_________mL制备稀释倍数为10倍的稀释液，并照此依次制备更高倍数的稀释液。取每个稀释倍数的菌液5mL进行过滤，然后将滤膜放置在伊红美蓝培养基上培养。如果经过培养后，稀释倍数为103对应的4个平板上菌落数分别为43、47、42、48个，那么每升河水约含大肠杆菌____________个。

（3）用上述方法统计样本中菌落数时需要设置对照组。若在调查中，某一实验组平板上菌落数平均数为46个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，请分析说明空白对照组出现菌落的可能性原因________________________________________________（答出三点即可）。若将40（即46-6）个/平板作为实验组菌落数的平均值进行计算，则该做法________（填“正确”或“不正确”）。

Answer 1

【答案】碳源和先机盐 前 使大肠杆菌的菌落呈现黑色，便于对大肠杆菌计数 无菌水9 9×l06 培养基灭菌不合格、倒平板过程被污染、培养皿灭菌不合格等 不正确

【解析】

微生物培养基的配方中，一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。平板培养基配制的基本流程为：计算→称量→溶化→调节pH→灭菌→倒平板。在对水样进行系列稀释操作时，可先在第一支试管中注入1mL水样与9mL无菌水，配成稀释倍数为10倍的稀释液，然后用移液管移从10倍稀释的试管中吸取1mL稀释液注入到第二支试管中，再在第二支试管中加入9mL无菌水，配成稀释倍数为100倍的稀释液，并照此依次制备更高倍数的稀释液。计算样品菌液中的菌株数时，每克样品中的菌株数＝（C÷V）×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表样品菌液的稀释倍数。为了检测培养基平板灭菌是否合格，可随机取若干灭菌后的空白平板进行对照培养一段时间，观察菌落的有无。用稀释涂布平板法测定同一样品中的细菌数时，为了保证结果准确，在每一个梯度浓度内，至少要涂布3个平板，确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300的平板进行记数，求其平均值。

(1) 微生物培养基成分应包括水、氮源、碳源和无机盐等。制备该培养基时应在灭菌之前调整pH。含伊红美蓝的培养基为鉴别培养基，该培养基中加入伊红美蓝的作用是：使大肠杆菌的菌落呈现黑色，便于对大肠杆菌计数。

(2) 制备稀释倍数为10倍的稀释液，需取水样1mL加入无菌水9 mL。取每个稀释倍数的菌液5mL进行过滤，然后将滤膜放置在伊红美蓝培养基上培养。如果经过培养后，稀释倍数为103对应的4个平板上菌落数分别为43、47、42、48个，那么每升河水约含大肠杆菌的数目是[(43＋47＋42＋48)÷4]÷5×103×103＝9×106个。

(3) 若在调查中，某一实验组的平板上菌落数平均数为46个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，则空白对照组出现菌落可能性原因是：培养基灭菌不合格、倒平板过程被污染、培养皿灭菌不合格等。为了保证结果准确，测定同一样品中的细菌数时，应在每一个梯度浓度内至少要涂布3个平板，确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300的平板进行记数，求其平均值，因此若将40（即46-6）个/平板作为实验组菌落数的平均值进行计算，则该做法是不正确的。