题目内容
【题目】多聚半乳糖醛酸酶（PG）能降解果胶使细胞壁破损，成熟的番茄果实中，PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。利用基因工程减少PG基因的表达，可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入番茄细胞中，得到转基因番茄，具体操作流程如图。据图回答下列问题：
（1）提取目的基因①若已获取PG的mRNA，可通过_______获取PG基因。②在该基因上游加结构A可确保基因的反向转录，结构A上应具有 结合位点。③重组质粒转移到大肠杆菌中的目的是______。
（2）用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有______的培养基进行筛选，培养24~48h后取样，在质量分数为25%的蔗糖溶液中，观察细胞________现象来鉴别细胞壁是否再生。
（3）由于导入的目的基因能转录出反义RNA，且能与_________互补结合，因此可抑制PG基因的正常表达。若转基因番茄的保质期比非转基因番茄________，则可确定转基因番茄培育成功。
（4）获得的转基因番茄产生的种子不一定保留目的基因，科研人员常采用 方法使子代保持转基因番茄的优良性状。
【答案】
（1）①反转录 ②RNA聚合酶 ③使目的基因随质粒的复制而增加
（2）卡那霉素 是否发生质壁分离
（3）天然PG基因转录的mRNA 长
（4）无性繁殖（或植物组织培养）
【解析】（1）已获取PG的mRNA，可通过逆转录（反转录）的方法获得目的基因。因转录的产物是mRNA，在转录时需要RNA聚合酶。重组质粒转化到大肠杆菌中的目的是大量复制目的基因。
（2）由图可知重组质粒中含卡那霉素抗性基因而四环素抗性基因被破坏，故可用含卡那霉素的培养基进行筛选。植物细胞在质量分数为25%的蔗糖溶液中会发生质壁分离现象，所以可以用来鉴别细胞壁是否再生。
（3）由以上分析可知，反义RNA与天然PG基因转录的mRNA结合，从而抑制翻译过程．若转基因番茄的保质期比非转基因番茄长，则可确定转基因番茄成功。
（4）获得的转基因番茄产生的种子不一定保留目的基因，植物组织培养属于无性繁殖，故科研人员常采用植物组织培养方法使子代保持转基因的优良性状。
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