题目内容
【题目】为了增加菊花花色类型，研究者从其他植物中克隆出花色基因C（图1），拟将其与质粒（图2）重组再借助农杆菌导入菊花中。请回答相关问题：
（1）研究者从其他植物中克隆出花色基因C时采用了PCR技术扩增，其中需要有一段____的核苷酸序列，以便根据这一序列合成___种引物除花色基因C引物之外，扩增过程中还需要_______，__________。
（2）为防止目的基因的自身环化和任意连接，有同学认为可以用 EcoRI和BamHI两种酶切割含C基因的DNA和图中质粒，有同学认为不妥，理由是________________。
（3）最后需要将重组质粒导入菊花细胞研究者采用了农杆菌转化法，这是利用了农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA（可转移的DNA）的特性：_______________。若导入的是菊花体细胞，还需要通过_____________才能得到菊花植株。
【答案】已知目的基因（花色基因C） 2 dNTP（dATp dTTP dCTP dGTP，或四种脱氧核酸） Taq酶（热稳定DNA聚合酶） 花色基因C两侧没有BamHI的识别序列，不能被BamHI酶切，质粒被EcoRI和BamHI两种酶切割后不能使目的基因连接在启动子和终止子之间。 可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上 植物组织培养
【解析】
基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
（1）研究者从其他植物中克隆出花色基因C时采用了PCR技术扩增，其中需要有一段_已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成2种引物，除花色基因C、引物之外，扩增过程中还需要dNTP（dATP dTTP dCTP dGTP，或四种脱氧核苷酸）、Taq酶（热稳定DNA聚合酶）。
（2）为防止目的基因的自身环化和任意连接，有同学认为可以用EcoRI和BamHI两种酶切割含C基因的DNA和图中质粒，有同学认为不妥，理由是花色基因C两侧没有BamHI的识别序列，不能被BamHI酶切，质粒被EcoRI和BamHI两种酶切割后不能使目的基因连接在启动子和终止子之间。
（3）最后需要将重组质粒导入菊花细胞，研究者采用了农杆菌转化法，这是利用了农杆菌中的Ti质粒上的T－DNA（可转移的DNA）的特性：可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。若导入的是菊花体细胞，还需要通过植物组织培养才能得到菊花植株。
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