题目内容
【题目】重组人血小板生成素（rhTPO）是一种新发现的造血生长因子，下图为通过乳腺生物反应器生产rhTPO的相关过程。回答下列问题：
（1）构建重组质粒时选用的限制酶是__________，原因是____________________。
（2）重组质粒中的标记基因是__________。通常采用__________技术将重组质粒导入受精卵。早期胚胎培养到__________阶段可以移植到代孕母羊体内。
（3）目的基因探针__________（填“能”或“不能”）检测转基因母羊是否为纯合子，理由是________。
（4）最终可以从羊乳汁中分离出血小板生成素（rhTPO）。检测羊乳汁中是否含有人血小板生成素（rhTPO），常用___________________技术。
【答案】HindⅢ和XhoⅠ用HndⅢ和XhoⅠ可以得到完整的rhTPO基因（或用SmaⅠ切割会破坏rhTPO基因）抗卡那霉素基因显微注射囊胚或桑椹胚不能无论转基因母羊是纯合子或杂合子，都能检测到目的基因抗原一抗体杂交
【解析】
据图示分析，图中目的基因rhTPO上存在3个限制酶切割位点，由于SmaⅠ的酶切位点位于目的基因的内部，利用该酶切割会破坏目的基因，因此应选择HindⅢ和XhoⅠ两种酶同时切割目的基因，而利用这两种限制酶切割载体后会破坏质粒上的抗四环素基因，因此应选择质粒上的抗卡那霉素基因为标记基因。
（1）构建重组质粒时选用的限制酶是HindⅢ和XhoⅠ，原因是SmaⅠ的酶切位点位于目的基因的中部，利用该酶切割会破坏目的基因。
（2）应选择质粒上的抗卡那霉素基因为标记基因；将重组质粒导入受精卵常采用显微注射法；一般待胚胎培养到囊胚或桑椹胚阶段可进行胚胎移植。
（3）无论转基因母羊是纯合子或杂合子，都能检测到目的基因，因此目的基因探针不能用于检测转基因母羊是否为纯合子。
（4）血小板生成素（rhTPO）本质是蛋白质，可利用抗原一抗体杂交进行检测。
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