题目内容
在基因工程技术中，下列方法与目的基因获得无关的是
- A.辐射诱变法
- B.散弹射击法
- C.反转录法
- D.人工合成法
考查提取目的基因的方法。基因工程中提取目的基因的方法主要有两条：一条是从供体细胞的DNA中直接分离目的基因，其中最常用的方法是“鸟枪法”，又叫“散弹射击法”。它是用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多段，将这些段分别载入运载体，然后转入不同的受体细胞，让供体细胞所提供的外源DNA在各个受体细胞中复制，从中找出含有目的基因的细胞，再把目的基因分离出来。另一条是人工合成目的基因。该方法有两条途径：一是用反转录法，以目的基因转录形成的信使RNA为模板，反转录成互补的DNA单链，再合成双链DNA；二是根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测信使RNA的序列，再推测相应结构基因的序列，然后通过化学方法合成。辐射诱变法能改变基因结构，不能获取目的基因。
，则2．(2012·天津理综)黄曲霉毒素B1(AFB1)存在于被黄曲霉菌污染的饲料中，它可以通过食物链进入动物体内并蓄积，引起癌变。某些微生物能表达AFB1解毒酶，将该酶添加在饮料中可以降解AFB1，清除其毒性。回答下列问题：
(1)AFB1属于________类致癌因子。
(2)AFB1能结合在DNA的G上，使该位点受损伤变为G*，在DNA复制中，G*会与A配对。现有受损伤部位的序列为，经两次复制后，该序列突变为________。
(3)下图为采用基因工程技术生产AFB1解毒酶的流程图。
据图回答问题：
①在甲、乙条件下培养含AFB1解毒酶基因的菌株，经测定，甲菌液细胞密度小、细胞含解毒酶；乙菌液细胞密度大、细胞不含解毒酶。过程Ⅰ应选择________菌液的细胞提取总RNA，理由是_____________________________________________________________。
②过程Ⅱ中，与引物结合的模板是____________________________________________________________。
③检测酵母工程菌是否合成了AFB1解毒酶，应采用________方法。
(4)选取不含AFB1的饲料和某种实验动物为材料，探究该AFB1解毒酶在饲料中的解毒效果。实验设计及测定结果见下表。
| 组别 | 添加 | 肝脏AFB1残留量(ng/g) | |
| AFB1 (μg/kg饲料) | AFB1解毒酶(g/kg饲料) | ||
| A | 0 | 0 | 6.4 |
| B | 100 | 0 | 20.9 |
| C | 100 | 1 | 16.8 |
| D | 100 | 3 | 11.7 |
| E | 100 | 5 | 7.3 |
| F | 100 | 7 | 7.3 |
据表回答问题：
①本实验的两个自变量分别为_____________________________。
②本实验中，反映AFB1解毒酶解毒效果的对照组是________。
③经测定，某污染饲料中AFB1含量为100 μg/kg，则每千克饲料应添加________克AFB1解毒酶，解毒效果最好，同时节约了成本。
(5)采用蛋白质工程进一步改造该酶的基本途径是：从提高酶的活性出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的________序列。
，则EcoRI的识别序列和切点是_____________________（切点用箭头标在序列上）。
，则EcoRI的识别序列和切点是_____________________（切点用箭头标在序列上）。
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