题目内容

【题目】I.新一代基因编辑工具由 Cas9(一种限制性核酸内切酶)和向导RNA构成。该复合体能与DNA分子上的特定序列结合,并在合适位点切断DNA双链(如下图所示)。DNA被切断后,细胞会启动DNA损伤修复机制,在此基础上如果为细胞提供一个修复模板,细胞就会按照提供的模板在修复过程中引入片段插入或定点突变,从而实现基因编辑。请回答:

(1)在将编码Cas9的基因导入真核细胞的转基因操作中,若控制合成Cas9的基因序列已知,可用_______方法合成目的基因,再构建表达载体导入真核细胞。上述转基因操作成功的标志________________

(2)如图1所示,基因编辑工具发挥作用时,向导RNA分子的序列与基因组DNA中特定碱基序列因为碱基互补序列所以能结合在一起,然后由Cas9催化__________键断裂,从而使 DNA分子断裂。

(3)一般来说,在使用基因编辑工具对不同基因进行编辑时,应使用Cas9和_____(填“相同”或“不同”)的向导RNA进行基因的相关编辑。

(4)如图2所示,若用两种识别切割序列完全不同的限制酶E和F从基因组DNA上切下目的基因,并将之取代质粒pZHZ1(3.7kb,1kb=1000对碱基)上相应的E—F区域(0.2kb)。已知在质粒pZHZl中,限制酶G切割位点距限制酶E切割位点0.8kb,限制酶H切割位点距限制酶F切割位点O.5kb。若分别用限制酶G和H酶切两份重组质粒pZHZ2样品,据表所列为酶切结果。请将目的基因内部的限制酶G和H切割位点标注在图3中。_______

Ⅱ.青光眼是导致人类失明的三大致盲眼病之一,其中发育性青光眼(婴幼儿型和青少年型)具有明显的家族遗传倾向。检查发现,发育型青光眼患者角膜小梁细胞中M蛋白异常。为研究其病因,研究者用含绿色荧光蛋白基因G或红色荧光蛋白基因R的质粒、正常人M蛋白基因(M+)或青光眼患者M蛋白基因(M-),构建基因表达载体,分别导入Hela细胞中进行培养,一段时间后检测培养液和细胞中荧光的分布情况,实验分组及检测结果如下表(示只含荧光蛋白基因的质粒片段;示含荧光蛋白基因和M蛋白基因的质粒片段,此时两基因表达的产物是一个整体)。

(1) 据下表推测,发育型青光眼的病因是_______异常导致其指导合成的M蛋白异常,导致小梁细胞中的M蛋白___________________,而在细胞中大量积累,最终导致小梁细胞功能异常。

(2)下表中第___________组实验可以判断:发育型青光眼是显性遗传病。

【答案】化学 控制Cas9基因的成功表达 磷酸二酯 不同 M蛋白基因 不能正常地分泌到细胞外 4组、5组、6组

【解析】

(1)获得目的基因的方法:①从基因文库中获取;②利用PCR技术扩增;③人工合成(化学合成)。原核生物的基因采取直接分离获得,真核生物的基因一般是人工合成。

(2)DNA重组技术至少需要三种工具:限制性核酸内切酶(限制酶)、DNA连接酶、运载体。

(3)目的基因的检测与鉴定,常用基因探针--用放射性同位素(或荧光分子)标记的含有目的基因DNA片段。

Ⅰ、分子水平上的检测:①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因常用DNA分子杂交技术;②检测目的基因是否转录出了mRNA常用分子杂交技术;③检测目的基因是否翻译成蛋白质常用抗原-抗体杂交技术。

Ⅱ、个体水平上的鉴定:抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

I.(1)对于基因序列已知的目的基因可以通过DNA合成仪用化学法直接人工合成。转基因成功的标志是合成目的基因的产物,本题中应为控制Cas9基因的成功表达。

(2)Cas9是一种限制性核酸内切酶,催化脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键水解,从而使 DNA分子断裂。

(3)如图所示,基因编辑工具发挥作用时,向导RNA分子的序列与基因组DNA中特定碱基序列因为碱基序列互补所以能结合在一起,所以在使用基因编辑工具对不同基因进行编辑时,应使用Cas9和不同的向导RNA进行基因的相关编辑。

(4)如图2所示,若用两种识别切割序列完全不同的限制酶E和F从基因组DNA上切下目的基因,并将之取代质粒pZHZ1(3.7kb,1kb=1000对碱基)上相应的E—F区域(0.2kb)。根据限制酶G和H单独切割重组质粒得到的两个片段之和均为4.7kb,说明目的基因的长度为4.7+0.2-3.7=1.2kb,已知在质粒pZHZl中,限制酶G切割位点距限制酶E切割位点0.8kb,限制酶H切割位点距限制酶F切割位点O.5kb,若分别用限制酶G和H酶切两份重组质粒pZHZ2样品,据表所列酶切结果可知,在重组质粒上含有两个限制酶G切割位点和两个限制酶H切割位点,说明插入的目的基因上分别含有一个限制酶G切割位点和一个限制酶H切割位点,根据单独使用限制酶G切割形成1.6kb和3.1kb两段,由于GE为0.8kb,说明距离E位点0.8kb的目的基因上有一个限制酶G切割位点,同理,根据单独使用限制酶H切割重组质粒形成1.2kb和3.5kb两段,由于FH为0.5kb,说明距离限制酶F切割位点的0.7kb的目的基因上有一个限制酶H切割位点(即距离质粒上H点1.2kb的目的基因上有限制酶H的切割位点),综上分析,目的基因上限制酶G切割位点和限制酶H切割位点之间的距离为0.3kb,故图示如下:

Ⅱ.(1)根据1和2组实验结果可知,在没有M蛋白的情况下,荧光标记只存在于细胞内,而和正常M蛋白基因连接后,荧光标记出现在了培养液中,即正常M蛋白合成后会分泌到细胞外,但是和青光眼患者M蛋白基因连接后,细胞外将不会出现荧光标记,由此可见,发育型青光眼的病因是M蛋白基因异常导致其指导合成的M蛋白异常,导致小梁细胞中的M蛋白不能正常地分泌到细胞外而在细胞中大量积累,最终导致小梁细胞功能异常。

(2)显性遗传病的个体只要含有致病基因就患病,结合上一小题的分析可知,表中第4组、5组、6组组实验可以为“发育型青光眼是显性遗传病”这一结论提供重要证据。

练习册系列答案
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(1)图1中是另一条多核苷酸链,则图示过程为_________

(2)若调查图2中此病的发病率,调查的结果显示,该地区此病的发病率为1%,则图2中Ⅱ-8与一个表现型正常男性结婚后所生男孩患病的几率是_____________

(3)若图2中Ⅱ-6和Ⅱ-7已不能提取相应的遗传物质,则要判断9与该家庭的关系,可比较9与_____________的线粒体DNA序列。

(4)控制图3的基因最可能位于________染色体上,主要理由是______________

Ⅱ.下图为哺乳动物的性染色体简图。X和Y染色体有一部分是同源的(图中Ⅰ片段),该部分基因互为等位:另一部分是非同源的(图中的Ⅱ,III片段),该部分基因不互为等位。从性遗传又称性控遗传。从性遗传是指常染色体上基因控制的性状,在表现上受个体性别的影响的现象。在杂合体中雄性表现为有角,雌性表现为无角。

绵羊有角和无角受一对等位基因(A,a)控制,雌雄都有有角个体出现。现有一只有角公羊与一只无角母羊交配所生的多胎小羊中,性成熟以后,凡公羊都表现为有角,凡母羊都表现为无角。试根据以上事实回答:(注:若性染色体上有角A基因为显性)

(1)绵羊的有角基因A是否位于Ⅱ片段?_____________。理由是:_____________

(2)根据以上事实。推测绵羊的有角性状的遗传有两种可能:一种是位于性染色体上_____的遗传,另一种从性遗传,若是从性遗传则无角母羊的基因型是:_____________

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