Question

【题目】血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O2或CO2的运输。请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题：

(1)将实验流程补充完整___________。

(2)凝胶色谱法的基本原理是根据_____________分离蛋白质。

(3)洗涤红细胞的目的是去除________，洗涤干净的标志是____________________。

(4)分离血红蛋白时，由上到下第________层是血红蛋白水溶液。

(5)下面是凝胶色谱法分离血红蛋白时样品的加入示意图，正确的加样顺序是________。

(6)如果红色区带________________，说明色谱柱制作成功。

Answer 1

【答案】血红蛋白的释放 凝胶色谱柱的装填 相对分子质量的大小 杂蛋白(或血浆蛋白) 离心后的上清液中没有黄色 三 ④①②③ 均匀一致地移动

【解析】

1、血红蛋白的提取与分离的实验步骤主要有：（1）样品处理：①红细胞的洗涤，②血红蛋白的释放，③分离血红蛋白；（2）粗分离：①分离血红蛋白溶液，②透析；（3）纯化：调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质；（4）纯度鉴定--SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

2、分析题图：第一个表格是：表示血红蛋白的释放，第二个表格是：凝胶色谱柱的装填。

（1）样品处理过程为：红细胞的洗涤→血红蛋白的释放→分离血红蛋白溶液→透析，所以第一个表格是：表示血红蛋白的释放，第二个表格是：凝胶色谱柱的装填。

（2）凝胶色谱法的原理是分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。

（3）洗涤红细胞的目的是去除杂质蛋白，洗涤干净的标志是离心后的上清液中没有黄色。

（4）分离血红蛋白溶液时，将搅拌好的混合液转移到离心管中，经过中速长时离心后，可明显看到试管中溶液分为4层，从上往下数，第1层为甲苯层，第2层为脂溶性物质的沉淀层，第3层为血红蛋白水溶液，第4层为杂质沉淀层。

（5）正确的加样顺序可依据样品在色谱柱及凝胶层中的渗入量进行分析，可以得出是④①②③。

（6）如果红色区带均匀一致地移动，说明凝胶色谱柱装填得很成功，同时分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出。