Question

【题目】为增加油菜种子的含油量，研究人员从陆地棉中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因：

（1）在________________酶处理后可得到___________端（填图中字母）相连的融合基因。

（2）将上述融合基因插入如图所示Ti质粒的T-DNA中，构建______________并导入农杆菌中。融合基因在农杆菌中无法表达所需产物的原因可能是__________。

（3）为实现有效表达，科研人员用农杆菌提取液浸染油菜细胞获得转基因细胞。在___________条件下，将转基因细胞接种在固体培养基上，经_________和_________形成转基因油菜。此过程除营养物质外还必须向培养基中添加_______________。

Answer 1

【答案】ClaⅠ（限制酶）和DNA连接 A、D 表达载体（或“重组质粒”） 融合基因选自真核生物，有内含子，在农杆菌中，其初始转录产物中与内含子对应的RNA序列不能被切除 无菌条件 脱分化 再分化 植物激素

【解析】

在已知序列的情况下，可用化学方法人工合成获取酶D基因（或PCR扩增）。由题图中酶D基因和转运肽基因都有ClaI酶切位点，可用ClaI酶切割酶D基因的A端和转运肽基因的D端，再用DNA连接酶将其连成融合基因 。

（1）用ClaI酶切割酶D基因的A端和转运肽基因的D端，再用DNA连接酶将其连接为A、D端相连的融合基因。

（2）将融合基因插入Ti质粒可形成重组质粒或者重组DNA；融合基因在农杆菌中无法表达所需产物的原因可能是：融合基因选自真核生物，有内含子，在农杆菌中，其初始转录产物中与内含子对应的RNA序列不能被切除。

（3）为实现有效表达，科研人员用农杆菌提取液浸染油菜细胞获得转基因细胞。在无菌条件下，将转基因细胞接种在固体培养基上，经脱分化和再分化形成转基因油菜。此过程除营养物质外还必须向培养基中添加植物激素。