题目内容
【题目】自然界中能够产生生物荧光的酶统称为荧光素酶。荧光素酶及其合成基因在生物研究中有着广泛的利用。
（1）荧光素酶基因常被作为基因工程中的标记基因，其作用是将_________筛选出来。
（2）为在短时间内获得大量的荧光素酶基因可利用______________技术进行扩增。
（3）迄今为止，可将上述具有荧光素酶基因的运载体导入动物细胞的技术，应用最多的、最有效的方法是____________。经一系列步骤，将所获得的胚胎早期培养一段时间后，再移植到雌性动物的__________或子宫内，使其发育成为具有新性状的动物。
（4）为提高对胚胎的利用率，对早期胚胎可进行的操作是___________。为确定荧光素酶基因是否在动物体内顺利地表达，常采用的方法是___________________。
（5）下表为4种限制酶的识别序列和酶切位点，下图为含有荧光素酶基因的DNA片段及其具有的限制酶切点。若需利用酶切法（只用一种酶）获得荧光素酶基因，最应选择的限制酶是 ____________。
【答案】含有目的基因的细胞 PCR 显微注射技术 输卵管 胚胎分割 抗原—抗体杂交 MspⅠ
【解析】
分析题图：含有目的基因的外源DNA分子中含有限制酶BamHⅠ、SmaⅠ、MboⅠ和MspⅠ的识别序列和切割位点，其中BamHⅠ的酶切位点在目的基因的中间，SmaⅠ的酶切位点只有一个，限制酶Sma I的酶切位点中包含有限制酶Msp I的酶切位点，因此要获得目的基因可用限制酶MspⅠ切割。
（1）标记基因的作用是将含有目的基因的细胞筛选出来。
（2）利用PCR技术进行体外扩增可在短时间内获得大量的荧光素酶基因。
（3）将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法。经一系列步骤，将所获得的胚胎早期培养一段时间后，再移植到雌性动物的输卵管或子宫内，可使其发育成为具有新性状的动物。
（4）对早期的胚胎进行胚胎分割，可获得更多相同基因型的胚胎，可以提高胚胎的利用率。检测荧光素酶基因是否表达，分子水平上可采用抗原-抗体杂交的方法。
（5）要获得目的基因必须在目的基因的两侧相应的酶切位点进行切割，根据上述分析可知，BamHⅠ的酶切位点在目的基因的中间，故不可取；MboⅠ的酶切位点只有一个，故不可取；根据表格可以看出，SmaⅠ的识别序列中含有MspⅠ的识别序列，因此要获得目的基因可用限制酶MspⅠ切割。
