Question

【题目】艾滋病（AIDS）是一种危害性极大的传染病，由感染艾滋病病毒（HIV）引起。早发现早治疗能有效的延长患者的寿命，提高患者的生活质量，目前医学上检测HIV的方法主要有两种：HIV核酸检测、HIV抗体检测。回答下列问题：

（1）HIV侵染人体后，病毒RNA比抗体早出现约1~2周，可通过核酸检测是否早期感染。通常是先提取疑似患者血清中的RNA通过逆转录得到__________，然后进行PCR扩增反应，此过程中使DNA解旋的方法是_____________。

（2）对扩增产物进行分析常采用特异性探针检测，通常采用带有标记的DNA________（填“单链”或“双链”）作为探针。探针与（1）中得到的核酸杂交，若观察到____________显示结果为阳性，则表明疑似患者体内有HIV。

（3）1~2周后，用抗体检测方法更能确诊是否感染。使用该方法的前提是制备能检测抗体的物质，一般采用基因工程方法，先获得HIV的特异基因，构建表达载体，其组成包括目的基因、启动子、终止子以及_______等，表达载体作用是____________。

（4）再将表达载体导入受体细胞，从受体细胞中分离得到HIV特异基因表达的蛋白质，可作为_________（填“抗原”或“抗体”）用于检测疑似患者血清。

Answer 1

【答案】DNA 高温 单链 杂交带 标记基因 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 抗原

【解析】

1、PCR的过程：①高温变性：DNA解旋过程；②低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链。PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开。

2、基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成；

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术，个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）HIV侵染人体后，病毒RNA比抗体早出现约1~2周，可通过核酸检测是否早期感染。通常是先提取疑似患者血清中的RNA通过逆转录得到DNA；然后进行PCR扩增反应，PCR扩增过程中高温使DNA解旋。

（2）DNA分子杂交技术是将转基因生物的基因组DNA提取出来，在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等做标记，以带有标记的DNA的单链作为探针；探针与（1）中得到的核酸杂交，如果出现杂交带，显示结果为阳性，则表明疑似患者体内有HIV。

（3）构建基因表达载体是基因工程成功的关键，其组成包括目的基因、启动子、终止子以及标记基因等；表达载体作用是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。

（4）从受体细胞中分离得到HIV特异基因表达的蛋白质作为抗原用于检测疑似患者血清是否存在HIV抗体。