题目内容

【题目】按照图示1→2→3→4进行实验,可验证朊病毒是蛋白质侵染因子。朊病毒是一种只含蛋白质而不含核酸的病原微生物,题中所用牛脑组织细胞为无任何标记的活体细胞。

1)本实验采用的方法是____________

2)从理论上讲,离心后上清液中_____________(填能大量几乎不能)检测到32P,沉淀物中_____________(填能大量几乎不能)检测到32P,出现上述结果的原因是___________________

3)如果添加试管5,从试管2中提取朊病毒后先加入试管5,同时添加35S标记的( NH4235SO4,连续培养一段时间后,再提取朊病毒加入试管3,培养适宜时间后离心,检测放射性应主要位于_______________中,少量位于__________中,原因是____________________________________________

【答案】同位素标记法 几乎不能 几乎不能 朊病毒不含核酸只含蛋白质,蛋白质中P含量极低,从试管2中提取的朊病毒几乎不含32P 沉淀物 上清液 经试管5中牛脑组织细胞培养出的朊病毒(蛋白质)被35S标记,提取后加入试管3中,35S随朊病毒侵入到牛脑组织细胞中,因此放射性物质主要位于沉淀物中,同时会有少量的朊病毒不能成功侵入牛脑组织细胞,离心后位于上清液中,因此上清液中含少量放射性物质

【解析】

根据题意可知,朊病毒是一种只含蛋白质而不含核酸的病原微生物,它不能独立生活,在活细胞内才能利用宿主细胞提供的原料,完成自身的增殖过程。

1)本实验采用的方法是同位素标记法。标记朊病毒需先培养带标记的宿主细胞——牛脑组织细胞,再让朊病毒侵染带标记的牛脑组织细胞,完成对朊病毒的标记。

2)因为朊病毒没有核酸,只有蛋白质,蛋白质中P含量极低,所以从试管2中提取的朊病毒几乎不含32P,即试管4中几乎没有32P

3)用35S标记的朊病毒侵入牛脑组织细胞,因此放射性物质主要位于沉淀物中,同时会有少量的朊病毒不能成功侵入牛脑组织细胞,离心后位于上清液中,因此上清液中含少量放射性物质

练习册系列答案
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【题目】人体内的t-PA蛋白能高效降解由血纤维蛋白凝聚而成的血栓,是心梗和脑血栓的急救药。然而,为心梗患者注射大剂量的基因工程t-PA会诱发颅内出血,其原因在于t-PA与血纤维蛋白结合的特异性不高。研究证实,将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸,能显著降低出血副作用。据此,先对天然的t-PA基因进行序列改造,然后再采取传统的基因工程方法表达该突变基因,可制造出性能优异的t-PA突变蛋白,该过程称为蛋白质工程。

(1)已知人t-PA基因第84位半胱氨酸的编码序列(即模板链的互补链序列)为TGT,而丝氨酸的密码子为UCU,因此突变基因编码该氨基酸的编码序列应设计为______

(2)上述突变基因(即目的基因)宜采用______方法获得。

(3)若获得的t-PA突变基因如图1所示,那么质粒pCLY11需用限制酶____________切开,才能与t-PA突变基因高效连接。

(4)将连接好的DNA分子导入大肠杆菌中,含t-PA突变基因重组DNA分子的细胞应具有的表型是______

A.新霉素抗性且呈蓝色 B.新霉素敏感且呈蓝色

C.新霉素抗性且呈白色 D.新霉素敏感且呈白色

(5)为了收获大肠杆菌表达的t-PA突变蛋白,第一步可采用常规的酶分离提纯方法。这种方法的基本操作顺序是______

A.破碎→过滤→沉淀→层析B.过滤→层析→破碎→沉淀

C.层析→沉淀→过滤→破碎 D.沉淀→破碎→层析→过滤

(6)层析是蛋白质或酶分离提纯的重要步骤。在图2所示的层析装置中,层析柱内装填了特定的细小固体颗粒(称为层析介质),待分离的蛋白质或酶混合溶液流进流出层析柱,便可将目标蛋白与杂蛋白高效分离。试根据题干信息判断,为了高效分离t-PA突变蛋白,层析介质表面事先应交联或固定______

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