Question

【题目】利用生物工程技术，可从转基因奶山羊乳汁中分离获得人凝血因子IV，用于血友病的治疗。请回答下列问题：

（1）根据凝血因子IV基因上游和下游的碱基序列，可用_____________技术获取并扩增基因；构建该基因表达载体时，所用到的工具酶是_____________，将人凝血因子IV基因与_____________的启动子等调控组件组在一起。

（2）将目的基因表达载体导入奶山羊受精卵的常用方法是__________________________。

（3）在体外胚胎培养时，应选用囊胚的_______________________进行DNA分析，用于选择雌性胚胎。此期的胚胎也适于胚胎分割移植，此技术的优点是_______________________。

（4）人凝血因子IV是一种胞外酶，该蛋白的加工是在________________________等细胞器上进行的。人凝血因子IV只在乳腺细胞合成的原因是____________________________

Answer 1

【答案】PCR 限制性核酸内切酶和DNA连接酶 乳腺蛋白基因 显微注射 滋养层细胞 提高胚胎的利用率 内质网、高尔基体 基因的选择性表达

【解析】

启动子是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质；终止子也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。分泌蛋白的合成、加工和运输过程：最初是在内质网上的核糖体中由氨基酸形成肽链，肽链进入内质网进行加工，形成有一定空间结构的蛋白质由囊泡包裹着到达高尔基体，高尔基体对其进行进一步加工，然后形成囊泡分泌到细胞外。在做胚胎性别鉴定时，需要取囊胚的滋养层细胞做DNA分析，进行性别鉴定。

（1）可以根据基因编码序列两端的部分碱基序列设计引物，用PCR技术进行体外大量扩增获得目的基因；构建该基因表达载体时，需要利用限制性核酸内切酶和DNA连接酶，将人凝血因子IV基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件组在一起，以便于基因的正常表达。

（2）将目的基因导入动物细胞（入奶山羊受精卵）最有效的方法是显微注射法。

（3）在做胚胎性别鉴定时，一般取囊胚的滋养层细胞做DNA分析，进行性别鉴定；胚胎分割移植技术可以提高胚胎的利用率。

（4）人凝血因子IV属于分泌蛋白，分泌蛋白的合成过程中需要内质网、高尔基体的加工；由于基因的选择性表达，人凝血因子IV只在乳腺细胞合成。