[题目]β-珠蛋白是哺乳动物血红蛋白的重要组成成分当它成分异常时.动物可能会患贫血症.现利用基因工程改造大肠杆菌.生产出β-珠蛋白下图表示所用的质粒以及酶切位点.已知质粒的总长为3．8kb(1kb=1000碱基对).其中的lacZ基因表达能使白色的大肠杆菌菌落呈现蓝色.回答下列问题:(1)质粒通过BamHⅠ切割后.含有 EcoRⅠ切割位点的DNA长� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

题目内容

【题目】β-珠蛋白是哺乳动物血红蛋白的重要组成成分当它成分异常时，动物可能会患贫血症。现利用基因工程改造大肠杆菌，生产出β-珠蛋白下图表示所用的质粒以及酶切位点，已知质粒的总长为3．8kb（1kb=1000碱基对），其中的lacZ基因表达能使白色的大肠杆菌菌落呈现蓝色。回答下列问题：

（1）质粒通过BamHⅠ切割后，含有 EcoRⅠ切割位点的DNA长度为____________kb。利用 Bam HⅠ和BglⅡ分别切割目的基因的两端，再将其与BamHⅠ切割后的质粒结合时，需要加入____________酶，以构成重组质粒。在目的基因与质粒结合时，质粒上 BamHⅠ切割位点与目的基因某一端的BglHⅠ切割位点能结合的原因是____________。

（2）若上述的重组质粒长度为4．65kb，则酶切后的目的基因长度为____________kb。根据重组质粒经BamHⅠ和 EcoRⅠ共同切割后的产物不同，可将重组质粒分为两种类型。若其中的一种可以获得2个长度分别为1．5kb和3．15kb的DNA片段，则另一种重组质粒通过 BamHⅠ和 EcoRⅠ共同切割后，获得的2个DNA片段长度分别为____________kb。

（3）将原始质粒和重组质粒分别导入大肠杆菌，则菌落颜色为____________色的受体菌可能会产生β-珠蛋白。

【答案】3．3 DNA连接 BamHⅠ和BglⅡ切割能够产生相同的黏性末端 1．35 1．8和2．85 白

【解析】

根据题意和图示分析可知：图示为构建工程菌的部分过程，可以将重组表达载体上的酶切位点标出，明确BamHⅠ和BglⅡ切割后的黏性末端能在DNA连接酶的作用下连接起来，但重组序列不能被BamHⅠ或BglⅡ酶割。

（1）质粒通过BamHⅠ切割后，0．5kb的片段被切割下来，由于原质粒长度为3．8kb，所以剩下的长度为3．3kb，而此片段含 EcoRⅠ切割位点；质粒与目的基因通过限制酶切割后，需要加入DNA连接酶，以构成重组质粒；质粒上BamHⅠ切割位点与目的基因某一端的BglⅡ切割位点都能形成GATC的末端，因而能够结合在一起。

（2）切割后的质粒为3．3kb，重组质粒长度为4．65kb，则目的基因长度为4．65-3．3=1．35kb；用Bal和 EcoR联合酶切其中一种，只能获得1．5kb和3．15kb两种DNA片段，说明质粒右侧的Baml和 EcoRI之间的长度为1．5，用BamHⅠ和EcoRⅠ联合酶切同等长度的另一种重组质粒，则切割的是BamHⅠ左侧的位点，可获得1．5+1．35=2．85kb和4．65-2．85=1．8kb两种DNA片段。