题目内容
【题目】临床上对胰岛素需求量很大。如图是利用奶牛乳腺生物反应器制备胰岛素的流程图，据图回答下列问题：
（1）构建重组质粒时，为避免人胰岛素基因末端发生任意连接和载体的自身环化应选用________________________酶处理目的基因和载体。要使人胰岛素基因在奶牛乳腺中特异性表达，应将人胰岛素基因与______________________等调控元件重组在一起。
（2）①过程常用______________处理奶牛A使其排出更多的卵子，然后在恰当时期采集卵子并培养成熟。②过程采集的奶牛精子常用____________________法使其获能，与成熟的卵子在专用受精溶液中完成受精。受精过程中，在精子触及______________的瞬间会产生透明带反应，这是防止多精入卵受精的第一道屏障。
（3）对移植前的胚胎需进行性别鉴定，一般采用SRYPCR方法。SRY-PCR法基本程序是：从被测的囊胚中取出几个______________（填“滋养层”或“内细胞团”）细胞，提取DNA；经PCR反应体系扩增SRY基因（Y染色体上特有的性别决定基因）片段，然后对扩增产物进行检测。
要大量获得SRY基因，PCR扩增时需要加入两种引物：__________（选填“引物I”、“引物II”、“引物III”、“引物IV”），原因是DNA聚合酶只能从核苷酸链的_____________（选填“5’端”或“3’端”）开始延伸DNA链。除引物外，PCR反应体系中还包含缓冲液、模板DNA、___________________和_______________等成分。最后选择出现____________（填“阳性”或“阴性”）反应的胚胎进行移植。
（4）为了使胚胎移植能成功，需要对代孕奶牛C进行_________________________处理，使之与供体的生理状况保持相同。）为了提高胚胎利用率，胚胎移植前可对胚胎进行_________________________处理。
【答案】PstⅠ、SmaⅠ 奶牛乳腺蛋白基因的启动子 促性腺激素 化学诱导 卵细胞膜 滋养层 引物I和引物IV 3’端 dNTP 热稳定DNA聚合酶（Taq 酶） 阴性 同期发情 胚胎分割
【解析】
基因工程的操作步骤：目的基因的获取；构建基因表达载体；把目的基因导入受体细胞；目的基因的检测和鉴定。
胚胎移植：指将雌性动物体内的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内，使之继续发育为新个体的技术。
（1）构建重组质粒时，为避免人胰岛素基因末端发生任意连接和载体的自身环化，应该选择不同的限制酶进行切割，AhaⅠ会破坏目的基因，故不能用AhaⅠ切割，又因为质粒没有PaⅠ酶的识别序列，目的基因上无HindⅢ的识别序列，故应选用PstⅠ、SmaⅠ酶处理目的基因和载体。要使人胰岛素基因在奶牛乳腺中特异性表达，应将人胰岛素基因与奶牛乳腺蛋白基因的启动子等调控元件重组在一起，可以从转基因奶牛的乳汁中提取胰岛素。
（2）①过程常用促性腺激素促进奶牛A产卵，然后在恰当时期采集卵子并培养成熟。②过程采集的奶牛精子常用化学诱导法处理使其获能，与成熟的卵子在专用受精溶液中完成受精。受精过程中，在精子触及卵细胞膜的瞬间会产生透明带反应，这是防止多精入卵受精的第一道屏障，精子入卵的第二道屏障是卵细胞膜反应。
（3）应该选择滋养层细胞，提取DNA进行性别鉴定。由于DNA聚合酶只能从核苷酸链的3’端开始延伸DNA链，故应该选择引物I和引物IV进行PCR扩增。除引物外，PCR反应体系中还包含缓冲液、模板DNA、dNTP和Taq 酶等成分。最后选择出现阴性反应的胚胎即为雌性进行移植。
（4）为了使胚胎移植能成功，需要对代孕奶牛C进行同期发情处理，使之与供体的生理状况保持相同。为了提高胚胎利用率，胚胎移植前可对胚胎进行胚胎分割处理，这样可以获得同卵双胎或多胎。
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