题目内容
【题目】下图表示生物工程相关技术操作流程示意图，A～D表示细胞或结构，①～⑤表示操作过程或处理方法，请据图回答：
(1)若上图表示植物体细胞杂交技术，则①②过程需利用_____酶处理细胞，⑧过程常用的诱导剂是______。
(2)若上图表示单克隆抗体的生产流程，Ａ表示已免疫的B淋巴细胞，则B表示______。
③过程得到的两两融合细胞有______种；经过筛选最后得到的杂交瘤细胞具有的特点是_____，单克隆抗体的优点是_____。
(3)若上图表示克隆动物的流程。A表示供体细胞，则经②处理后得到的B为_____，为满足营养需求，在培养c细胞时培养液中需要加入______等天然成分，此外还需加入一定浓度的CO2，目的是____。
【答案】纤维素酶(和果胶酶) 聚乙二醇(PEG) 骨髓瘤细胞 3 既能迅速大量增殖，又能产生专一的抗体 特异性强、灵敏度高并可大量制备 去核的(次级)卵母细胞 动物血清(血浆) 维持培养液的pH
【解析】
1、植物体细胞杂交的过程：将植物细胞A与植物细胞B用纤维素酶和果胶酶处理，得到不含细胞壁的原生质体A和原生质体B，运用物理方法或是化学方法诱导融合，形成杂种细胞，再利用植物细胞培养技术将杂种细胞培养成杂种植物体。
2、单克隆抗体的制备过程：首先用特定抗原注射到小鼠体内，使其发生免疫，小鼠体内产生具有免疫能力的B淋巴细胞。利用动物细胞融合技术将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，单克隆抗体制备过程中的两次筛选：第一次筛选：利用特定选择培养基筛选，获得杂交瘤细胞，即AB型细胞(A为B淋巴细胞，B为骨髓瘤细胞)，淘汰A、B、AA、BB型细胞。第二次筛选：利用多孔板法和抗原一抗体杂交法筛选，获得产生特定抗体的杂交瘤细胞。
(1)若上图表示植物体细胞杂交技术，则①②过程需利用纤维素酶处理细胞使其成为原生质体，然后再利用常用的诱融剂聚乙二醇诱导其融合。
(2)若上图表示单克隆抗体的生产流程，Ａ表示已免疫的B淋巴细胞，则B表示骨髓瘤细胞，经过诱导融合后可筛选出既能产生特异性抗体又能无限增殖的杂交瘤细胞。③过程得到的两两融合细胞有B细胞B细胞的融合体、骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞的融合体以及B细胞和骨髓瘤细胞形成的杂交瘤细胞共3种；经过筛选最后得到的杂交瘤细胞具有的特点是既能迅速大量增殖，又能产生专一的抗体。单克隆抗体的优点是特异性强、灵敏度高并可大量制备。
(3)克隆动物是将供体的细胞核移植到受体去核的卵母细胞中，将换核的卵母细胞再培养成个体的过程。所以若上图表示克隆动物的流程，A表示供体细胞，则经②处理后得到的B为去核的(次级)卵母细胞，C为重组细胞，D为重组细胞发育成的早期胚胎，⑤为胚胎移植。动物细胞培养的培养液中需要加入动物血清等天然成分，以满足细胞的营养需求。此外还需加入一定浓度的CO2，目的是维持培养液的pH。
小学课时特训系列答案
【题目】海洋石油污染正引起光泛关注。利用基因工程菌进行生物降解具有巨大的应用潜力。P450是石油降解的关键酶，用Sal I和NdeI联合酶切获得的P450基因，与甲图所示的质粒pCom8重组，导入土著石油降解菌种Y9，获得了基因工程菌中mel是黑色素合成基因，其表达能使白色的菌落变成黑色，aacCl是庆大霉素（一种抗生素）抗性基因，限制酶NdeI、XhoI和SspI在原质粒上均只有一个酶切位点，数字表示酶切位点间的碱基对数，乙图表示几种限制酶的识别序列和切割位点。
(1)构建重组质粒时，需要使用限制酶和_____酶。图乙所示的几种限制酶中，切割目的基因产生平末端的是_______。
(2)质粒pCom8需用限制酶_____作用后，才能与P450基因形成重组质粒：为了便于重组质粒的导入，常使用_____处理Y9细胞，使其成为感受态细胞。若对重组质粒再次使用上述限制酶切制，可获得_____个DNA片段。
(3)经测定原质粒为7.6kb(1kb为1000个碱基对)，重组质粒经NdeI.SspI联合酶切后获得了6.0kb和1.2kb的两个片段，则目的基因的长度为______kb。
(4)由于重组质粒导入受体细胞的成功率很低，所以需要经过筛选才能获得工程菌。操作的大致思路是：
第一步，配制培养基。除下表中的成分外，还必须添加琼脂和_____。
蛋白胨 | 酵母侵膏 | NaCl | KCl | MgCl2 | H2O | pH |
20g | 5.0g | 0.5g | 0.2g | 1.0g | 1000ml | 7.0 |
第二步，将待检菌液接种在第一步配制的培养基上。
第三步，选择_____色菌落扩大培养即可获得所需的工程菌。
