题目内容
【题目】如图表示构建基因表达载体所用的质粒与目的基因。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。据图分析，下列叙述正确的是（ ）
A.使用限制酶Ⅰ、Ⅱ切割可以防止目的基因自身环化
B.限制酶Ⅱ可以切割两种标记基因，所以没有特异性
C.可以用限制酶Ⅱ切割质粒、限制酶工切割目的基因
D.将目的基因插入到四环素抗性基因内完成构建
【答案】D
【解析】
已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是-G↓GATCC-，酶Ⅰ切割质粒不会把两个标记基因都破坏，最好选择限制酶I切割质粒。限制酶Ⅱ的识别序列和切点是一↓GATC-，目的基因两端均有酶Ⅱ的识别序列，因此用限制酶II切割目的基因所在的DNA。
A、限制酶Ⅰ的识别序列和切点是-G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-，两者产生的粘性末端相同，不能防止目的基因自身环化，A错误；
B、限制酶Ⅱ可以切割两种标记基因，是因为两种标记基因中含有-GATC-核苷酸序列，限制酶识别切割位点具有特异性，B错误；
C、目的基因只有一端具有GGATCC的片段，只能用限制酶Ⅱ切割。质粒上有两个GATC片段，若用限制酶Ⅱ切割，会将质粒切成两小段，只能用限制酶Ⅰ切割，C错误；
D、用限制酶Ⅰ切割质粒的切割位点在四环素抗性基因内部，所以将目的基因插入到四环素抗性基因内完成构建，D正确。
故选D。
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