Question

【题目】如图是科学家利用大肠杆菌生产人胰岛素的部分过程。请结合相关知识回答问题：

（1）除图示方法获得目的基因（人胰岛素基因）外，还可通过________的方法获得目的基因。

（2）图示所获得的人胰岛素基因在大肠杆菌中不能表达，需要质粒为其提供________、终止子等调控因子，质粒含有一个或多个________切割位点，供目的基因插入其中；质粒上还含有________，供重组DNA的鉴定和选择。

（3）图中切割人胰岛素基因和质粒的酶（酶A）相同，其目的是________，将重组DNA分子导入大肠杆菌后，常需用________技术检测目的基因是否转录出了mRNA。

Answer 1

【答案】人工合成 启动子 限制酶 标记基因 获得相同的末端 分子杂交

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

1.目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成；

2.基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；

3.将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；

4.目的基因的检测与鉴定：
（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术；
（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）获取目的基因的方法除题图所示方法外，还有人工合成法。

（2）图示所获得的人胰岛素基因由于不含启动子和终止子，因此需要运载体——质粒提供，质粒上含有一个或多个限制酶切割位点，供目的基因插入其中，质粒上还含有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。

（3）用同一种限制酶切割目的基因和质粒，以便获得相同的黏性末端。通常通过分子杂交技术来检测目的基因是否转录出了mRNA。