Question

【题目】某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因．利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题．
（1）抗盐某因是否在烟草细胞中稳定遗传的关键是 ．
（2）在构建重组质粒时，应选用和两种酶对目的基因和质粒进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性．
（3）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法．含有目的基因的农杆菌可根据标记基因进行筛选．若农杆菌在含有氨苄青霉素和四环素的培养基上都可以生长繁殖，农杆菌中是否己含有目的基因？（是/否）．为什么？ ．
（4）愈伤组织经形成完整植株，这一过程需要再转接到培养基上进行培养，该过程的实质是 ．

Answer 1

【答案】
（1）抗盐基因（目的基因）是否插入到烟草的染色体DNA上
（2）HindⅢ； SalⅠ
（3）否；含有目的基因的质粒抗四环素的基因被破坏
（4）再分化；分化；基因的选择性表达
【解析】解：（1）抗盐某因是否在烟草细胞中稳定遗传的关键是抗盐基因（目的基因）是否插入到烟草的染色体DNA上．（2）质粒和含有目的基因的外源DNA分子上都含有SalI、Hindm、BamHI三种限制酶切割位点，其中BamHI的切割位点位于目的基因上，用该酶切割会破坏目的基因；若只用SalI一种限制酶切割可能会导致目的基因与运载体反向连接；因此在构建重组质粒时，应选用SalI和HindIII两种限制酶对质粒和含有抗盐基因的DNA进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性．（3）构建基因表达载体时，抗四环素基因被破坏，但抗氨苄青霉素的基因没有被破坏，因此含有重组质粒的农杆菌在含有四环素的培养基上不能生存，但在含有氨苄青霉素的培养基上能生存．（4）植物组织培养包括脱分化和再分化两个阶段，脱分化形成的愈伤组织需经再分化形成完整植株，这一过程需要再转接到分化培养基上进行培养；细胞分化的实质是基因的选择性表达．

所以答案是：（1）抗盐基因（目的基因）是否插入到烟草的染色体DNA上（2）HindⅢSalⅠ（3）否 含有目的基因的质粒抗四环素的基因被破坏（4）再分化 分化 基因的选择性表达

【考点精析】利用基因工程的原理及技术对题目进行判断即可得到答案，需要熟知基因工程的原理是利用DNA重组技术．