题目内容
【题目】下图为三种质粒和一个含目的基因的 DNA 片段，其中 Ap 为氨苄青霉素抗性基因，Tc 为四环素抗性基因，lacZ 为蓝色显色基因，EcoRⅠ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8Kb）等为限制酶及其切割位点与复制原点之间的距离。已知1 kb＝1000个碱基对的长度。请回答下列问题：
（1）片段 D 为目的基因中的某一片段，则限制酶和 DNA 连接酶的作用部位依次是_______________ 、______________（填图中数字标号））
（2）图中能作为目的基因运载体最理想的质粒是__________（填A/B/C））据图分析，其他两种质粒一般不能作为运载体的理由分别是______________、_________。
（3）如果将目的基因和质粒 A 构建重组质粒,然后再用 EcoRⅠ酶切这个重组质粒，进行电泳观察，可出现长度分别为 1.1 kb 和_________________kb 的两个片段，或者长度分别为___________kb 、_________kb的两个片段。
【答案】② ② B 质粒A缺少标记基因 质粒C在用和目的基因相同的限制酶切割时，复制原点会被破坏 5.4 3.1 kb 3.4kb
【解析】
分析题图：如图所示为三种质粒和一个含目的基因的DNA片段示意图．图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因。EcoRⅠ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8Kb）等为限制酶及其切割的位点与复制原点的距离。片段D中，①是氢键，②是磷酸二酯键。
（1）DNA聚合酶和DNA连接酶的作用部位均为磷酸二酯键，即图中部位②。
（2）图中质粒A缺少标记基因；质粒C在用和目的基因相同的限制酶切割时，复制原点会被限制酶切割，会影响重组质粒的自主复制．因此，能作为目的基因运载体最理想的质粒是B。
（3）目的基因和质粒A形成的重组质粒总长度为4.0+2.5=6.5kb（质粒+切割出来的目的基因）、其中重组质粒含有两个EcoRⅠ酶切位点，一个在插入的目的基因中，一个在原质粒中。若用EcoRⅠ酶切该重组质粒必然会产生2个片段，若产生的其中一个片段长度为1.1Kb，则说明另一个片段6.5-1.1=5.4kb；若目的基因与质粒A的连接位置与前一种刚好相反，重组质粒的总长度不变，但经EcoRⅠ酶切后产生的两个片段长度不同，分别为（1.3-1.2）+（4.0-1.0）=3.1Kb、6.5-3.1=3.4Kb。
