题目内容
【题目】科学家从某细菌中提取抗盐基因，转入烟草并培育成转基因抗盐烟草。下图是转基因抗盐烟草的培育过程，含目的基因的DNA和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。请分析回答下列问题：
（1）在该过程中，研究人员首先获取了抗盐基因（目的基因），并采用____________技术对目的基因进行扩增，该技术扩增目的基因的前提是_________________________，以便根据这一序列合成引物，同时该技术必须用_____________酶；然后构建基因表达载体，其目的是_________________________。
（2）用图中的质粒和目的基因构建重组质粒，不能使用Sma I酶切割，原因是________________________。
（3）图中⑤、⑥依次表示植物组织培养过程中抗盐烟草细胞的____________、____________过程。
（4）为确定转基因抗盐烟草是否培育成功，既要进行分子杂交检测，又要在个体水平上鉴定，后者具体过程是_____________________________________________________________。
【答案】PCR 要有一段已知目的基因的核苷酸序列 Taq（热稳定DNA聚合酶） 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用 SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因 脱分化 再分化 将培育的烟草幼苗栽培于含有一定盐的土壤中，观察该烟草植株的生长状态
【解析】
基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成；
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
（1）基因工程的第一步是获取目的基因，该基因工程中目的基因是抗盐基因，然后采用PCR技术对目的基因进行扩增，扩增目的基因的前提是要获得一段已知目的基因核苷酸序列以便合成引物，同时还必须用Taq（热稳定DNA聚合酶）酶；获得目的基因后，进行基因表达载体的构建，以保证目的基因在受体细胞中能稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。
（2）图中的质粒和目的基因中SmaⅠ的酶切位点包含在质粒的抗性基因和目的基因中，因此在构建重组质粒时不能使用Sma I酶切割，若选择该酶会导致质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因被切割。
（3）图中⑤为脱分化形成愈伤组织的过程，⑥为再分化形成耐盐幼苗的过程，这两个过程是植物组织培养过程中的关键步骤。
（4）为确定转基因抗盐烟草是否培育成功，既要进行分子杂交检测，又要在个体水平上鉴定，个体水平上鉴定的具体做法是将培育的烟草幼苗栽培于含有一定盐浓度的土壤中，观察该烟草植株的生长状态，若生长良好则意味着培育成功。
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【题目】现有两种淀粉酶A与B，某生物兴趣小组为探究不同温度条件下这两种淀粉酶的话性，设计实验如下：
实验原理：温度等条件可以影响酶的活性；淀粉在淀粉酶的催化作用下产生麦芽糖。
实验材料：一定浓度的淀粉溶液、相同浓度的淀粉酶A和淀粉酶B溶液、水浴缸、温度计等。
实验过程：如表所示，
组别 步骤 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
①设置水浴缸温度 （℃） | 20 | 30 | 40 | 50 | 20 | 30 | 40 | 50 |
②取8支试管各加入淀粉溶液（mL），分别保温5min | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 |
③另取8支试管各加入等量淀粉酶溶液，分别保温5min | 酶A | 酶A | 酶A | 酶A | 酶A | 酶A | 酶A | 酶A |
④将同组两个试管中的淀粉溶液与淀粉酶溶液混合摇匀，保温5min | ||||||||
实验结果：图甲是40℃测定酶A催化淀粉水解生成的麦芽糖的量随时间变化的曲线；图乙是实验第④步保温5分钟后对各组淀粉剩余含量进行检测的结果。
（1）生物体内的酶是由__________产生的，本质是________，酶能起催化作用的机理是__________。
（2）该实验的自变量是__________，无关变量有_________________（至少写出2种）。
（3）若适当降低温度，图甲中P点将向_________（填“左”或“右”）移动，原因是____________________，因此酶制剂适于在_________下保存。
（4）实验用分光光度计检测底物淀粉的剩余量来表示酶的活性，该实验不能用斐林试剂检测生成物麦芽糖的含量，原因是______________________________。
