题目内容
【题目】人类是乙型肝炎病毒的唯一宿主，现有的肝硬化、肝癌多从乙肝发展而来，接种乙肝疫苗是预防乙肝病毒感染的最有效方法。乙型肝炎疫苗的研制先后经历了血源性疫苗和基因工程疫苗阶段。乙肝基因工程疫苗的生产和使用过程如下：
（1）从图可知，该目的基因的具体功能是______。
（2）若要迅速获取大量的目的基因，以提高重组质粒生产的效率，常用的技术是（写全称）______。过程②常需要 处理大肠杆菌细胞，促使转化完成。
（3）要形成有效的重组质粒，选择适当的限制性内切酶很重要，图1示意大肠杆菌质粒的相关基因与限制酶切点；图2示意有关限制酶在DNA分子中的具体切点。
①要成功转入目的基因，有两种选择限制酶的方案，它们分别是______或______。
②下图是筛选、获取含有目的基因大肠杆菌的基本过程：B、C培养基中除基本营养物质外还应分别加入的抗生素 、 ，在B、C两个培养基中含有重组质粒的大肠杆菌形成的菌落共有 个。
【答案】（1）指导乙肝病毒蛋白质外壳的合成
（2）PCR Ca2+
（3）①只用BamH Ⅰ 同时用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ
②卡那霉素和四环素 卡那霉素 两
【解析】（1）根据图中④目的基因最终产生乙肝病毒外壳进行接种，说明该目的基因具体功能是指导合成乙肝病毒蛋白。
（2）本题较为简单但学生却容易忽略而出错，记不清楚PCR全称为多聚酶链式反应；过程②常需要Ca2+处理大肠杆菌细胞，促使转化完成。
（3）①只用BamH Ⅰ切割，在获取目的基因和切割质粒时使目的基因和质粒两端产生相同的黏性末端，而在连接酶作用会出现自身环化、目的基因自身与自身连接、质粒自身与自身连接、目的基因与质粒连接多种情况，需要筛选；同时用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ切割，质粒和目的基因两端不会形成相同黏性末端，在连接酶作用下不会发生环化还可以防止反向连接，最终在连接酶作用下只会出现目的基因与质粒成功重组和没有进行重组的质粒．
②本题考查在获得重组质粒时不会切割四环素抗性基因，由图二知BamHⅠ可切割破坏四环素抗性基因，所以出现能保持四环素抗性基因完整的应该是用HindⅢ和EcoRⅠ进行切割质粒，所以最终会出现成功重组的质粒和没有进行重组的质粒保持四环素抗性基因完整，为2种．。 本题主要考察筛选含目的基因受体细胞方法，依据原理是根据重组质粒上的抗性基因做抗性接种试验，观察受体细胞是否能够存活，存活的则含有重组质粒，即含有目的基因，因此可以在培养基中加入卡那霉素和四环素。
