Question

【题目】下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图 1、图 2 中标注了相关限制酶的酶切位点。

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	Sau3AⅠ	HindⅢ
识别序列及切割位点

【1】若图 2 中目的基因 D 是人的 α-抗胰蛋白酶的基因，现在要培养乳汁中含 α-抗胰蛋白酶的羊，研究者需将该基因与质粒重组后，通过______方法）注入到羊的_____中。

【2】Sau3AI 酶切割 DNA 得到的粘性末端是_________。Sau3AI 酶能不能切开 BamH I 酶与 Bcl I 酶的识别序列？_____。

【3】用图 1 中质粒和图 2 目的基因构建重组质粒，应选用_____、_____两种限制酶切割。

【4】被限制酶切割后的运载体和目的基因片段，通过_____酶作用后获得重组质粒。

【5】若 BamH I 酶切的 DNA 末端与 Bcl I 酶切的 DNA 末端连接，连接部位的 6 个碱基对序列为_____。

【6】若按照 65 题中的两种限制酶切割，并将重组质粒导入大肠杆菌，则导入成功的大肠杆菌

A.对四环素敏感对氨苄青霉素不敏感B.对四环素不敏感对氨苄青霉素敏感

C.对四环素和氨苄青霉素都敏感D.对四环素和氨苄青霉素都不敏感

Answer 1

【答案】

【1】 显微注射 受精卵

【2】 能

【3】 Bcl I HindⅢ

【4】DNA连接酶

【5】

【6】B

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

1、目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

2、基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

3、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

【1】

基因与质粒重组后，通过显微注射的方法注入到羊的受精卵中。

【2】

根据表格中限制酶的识别序列及切割位点，可知Sau3AI 酶切割 DNA 得到的粘性末端是；由于BamH I 酶与 Bcl I 酶的识别序列中都包括Sau3AI的识别序列，所以能切开二者的识别序列。

【3】

由于BamH I和Sau3AI会破坏质粒中的两个抗性基因，不利于后期的筛选，所以应选用限制酶Bcl I和HindⅢ。

【4】

被限制酶切割后的运载体和目的基因片段，通过DNA连接酶连接二者之间的磷酸二酯键，从而获得重组质粒。

【5】

根据BamHⅠ和BclI的酶切位点，若BamHI酶切的DNA末端与BclI酶切的DNA末端连接，则连接部位的6个碱基对序列为。

【6】

用限制酶Bcl I和HindⅢ切割，会破坏氨苄青霉素抗性基因，但不会破坏四环素抗性基因，则导入成功的大肠杆菌对四环素不敏感对氨苄青霉素敏感。

解题本题的关键，首先是理解好几种酶的识别序列和切割位点，然后通过质粒和目的基因所位于的片段上，几种酶的切割位点来解决问题。