题目内容
【题目】内皮素（ET）是一种含21个氨基酸的多肽,具有强烈的血管收缩和促进平滑肌细胞增殖等作用,其功能异常与高血压、糖尿病、癌症等有着密切联系.ET主要通过与靶细胞膜上的ET受体结合而发挥生物学效应.ETA是ET的主要受体,科研人员试图通过构建表达载体,实现ETA基因在细胞中高效表达,为后期ETA的体外研究以及拮抗剂的筛选、活性评价等奠定基础.其过程如图所示,图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因,限制酶ApaⅠ的识别序列为
,限制酶XhoⅠ的识别序列为
.请分析回答:
（1）完成过程①需要加入缓冲液、原料、引物、dNTP和_____酶等
（2）过程③和⑤中,限制酶XhoⅠ切割DNA,使______键断开,形成__________。
（3）构建的重组表达载体,目的基因上游的启动子是__________的部位，进而可驱动基因的转录。其中氨苄青霉素抗性基因的作用是___________。除图中所标出的结构外，基因表达载体还应具有的结构是____________。
（4）过程⑥要用_____预先处理大肠杆菌,使其成为处于容易吸收外界DNA的感受态细胞.
（5）将SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因,其目的是有利于检测______________________。
【答案】 反转录（逆转录） 磷酸二酯 黏性末端 RNA聚合酶识别和结合 筛选含有目的基因（ETA基因）的受体细胞 终止子 CaCl2 ETA基因能否表达及表达量
【解析】试题分析：①②③表示通过逆转录法获得目的基因，④表示构建基因表达载体，⑤表示限制酶切割质粒，⑥表示将重组质粒导入受体细胞，⑦表示目的基因的检测。构建基因表达载体时，目的基因上游的启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因的转录。将目的基因导入大肠杆菌时，需用Ca2+处理使其处于感受态，容易吸收外界DNA。SNAP基因是一种荧光蛋白基因，与ETA基因结合构成融合基因，可用于检测ETA基因能否表达及表达量。
（1）过程①是逆转录过程，需要逆转录酶的催化。（2）限制酶切割DNA，使磷酸二酯键断开，形成黏性末端。（3）目的基因上游的启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，从而驱动基因的转录。其中氨苄青霉素抗性基因是标记基因，用于筛选含有目的基因（ETA基因）的受体细胞。基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子、标记基因，所以除图中所标出的结构外，还应有终止子。（4）过程⑥将目的基因导入大肠杆菌，要用CaCl2处理，使之处于感受态，容易吸收外界DNA。（5）SNAP基因是一种荧光蛋白基因，与ETA基因结合构成融合基因，可用于检测ETA基因能否表达及表达量。
