题目内容
【题目】甲醇可诱导激活酵母基因A的启动子，使基因A高效表达，因此在基因工程中常将基因A的启动子拼接在目的基因序列前，提高目的基因的表达量。现用酵母生产乙肝疫苗，目的基因序列简图及相关酶切位点如图1所示，携带目的基因进行转化的质粒结构如图2所示。
（1）在乙肝携带者体内能分离到一种空的乙肝病毒外壳，这种病毒外壳 ___________（“能”或“不能”）作为乙肝疫苗使用。为了获得对乙肝的抗性，需要反复注射三次疫苗，原因是______________________。
（2）根据图1和图2所示的序列，应在位置___________（填“①”或“②”）添加上___________（填限制性核酸内切酶名称）切割位点。
（3）为得到转化成功的酵母，可使用加入___________培养基进行筛选。为了让抗原基因大量表达，还需在培养基中加入___________。在投入生产前，需用___________的方法检验疫苗的特异性。
（4）为了使乙肝抗原基因能在酵母细胞中稳定存在，最好的方法是将含目的基因的DNA___________。
【答案】 能 反复注射抗原，可使机体产生较一次免疫更大量的抗体和记忆细胞，对病毒作出快速免疫应答 ① EcoRⅠ 氨苄青霉素 甲醇 抗原-抗体杂交技术 整合到酵母细胞染色体DNA中
【解析】结合图1分析，为了获得完整的目的基因，选用的限制酶不能在“ATG---TAA”序列的中间，所以所选限制酶只能在①处切割和用NotⅠ在目的基因的另一端处切割。结合图2中质粒上存在的限制酶切割位点，①处选用的限制酶最好是EcoRⅠ.因为目的基因的两端选用不同的限制酶切割产生的黏性末端不同，这样切割出来的目的基因和质粒在连接时能保证它们既不自相连接，也不反向连接。
（1）乙肝病毒带有能引起机体特异性免疫反应的抗原，其中外壳蛋白才是直接接触免疫系统的物质，所以推测病毒中作为抗原的是外壳，换句话说，乙肝病毒外壳可作为疫苗使用。注射乙肝疫苗常常要注射三次，主要目的是可使机体产生比一次免疫更大量的抗体和记忆细胞，对病毒作出快速免疫应答。
（2）根据前面的分析，在含目的基因的图1中，应在位置①添加上EcoR Ⅰ的切割位点，这样才能保证切割出完整目的基因，同时能在质粒上切出相同切口并与之能按特定方向连接。
（3）筛选转化成功的酵母常常需要根据质粒上存在的标记基因，即抗氨苄青霉素基因的作用想到在培养基中加入氨苄青霉素，若转基因酵母能表现出其应有的抗性，则说明转化成功。根据转化成功的酵母具有甲醇诱导下高效表达的特点，还需在培养基中加入甲醇进行筛选。由于疫苗是抗原，所以在投入生产前，需用抗原-抗体杂交的方法检验疫苗的特异性。
（4）为了使乙肝抗原基因能在酵母细胞中稳定存在，最好的方法就是将含目的基因的DNA整合到酵母细胞染色体DNA中。
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