题目内容
【题目】【生物——选修1:生物技术实践】某兴趣小组采用稀释涂布平板法对牛奶样品中的微生物进行计数，步骤如下。回答下列问题:
（1）梯度稀释：每次取样前需用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，目的是____________。
（2）涂布平板：取O.lmL稀释液，选用下图中的____________均匀地涂布在牛肉膏蛋白腺固体培养基表面，每个浓度下涂布三个平板。为避免杂菌污染，接种应在_____________________附近进行。可用____________的培养基作为空白对照以检验培养基配制是否达标。
（3）培养与计数：将上述平板放入恒温培养箱中培养，每隔12小时统计一次菌落数，取菌落数稳定时的记录作为结果，防止______________。在104、105、106倍稀释时的统计结果记录如下表：
计算得每毫升牛奶样品中细菌数大约是___________个。这种方法统计的活菌数往往比实际数目低，原因是___________。除此以外，___________也是测定微生物数量的常用方法，此方法需要使用血细胞计数板。
【答案】 使微生物和无菌水混合均匀 B （酒精灯）火焰 未接种 因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目 5×l07 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 显微镜直接计数
【解析】试题分析：本题考查微生物的计数的有关知识，意在考查考生对知识的识记、理解和运用能力。
（1）每次取样前需用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，目的是使微生物和无菌水混合均匀。
（2）稀释涂布平板法在涂布平板是需要用到涂布器。图中B是涂布器，所以用C滴管取O.lmL稀释液后，需要选择B涂布器均匀地涂布在牛肉膏蛋白腺固体培养基表面。为避免杂菌污染，接种应在（酒精灯）火焰附近进行。为检验培养基配制是否达标要用未接种的培养基作为空白对照。
（3）统计菌落数量时，应取菌落数稳定时的记录作为结果，防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。一般选择菌落数在30-300的平板进行计数，因此要选择稀释倍数为倍且培养时间为48h的统计结果进行计数，每毫升牛奶样品中细菌数大约是×=5×个。这种方法统计的活菌数往往比实际数目低，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。除此以外，显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法，此方法需要使用血细胞计数板。
项目 | 条件 | 结果 | 常用方法 | 应用范围 |
消 毒 | 较为温和的物理或化学方法 | 仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物 | 煮沸消毒法 | 日常用品 |
巴氏消毒法 | 不耐高温的液体 | |||
化学药剂消毒法 | 用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源 | |||
灭 菌 | 强烈的理化因素 | 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 | 灼烧灭菌法 | 接种工具 |
干热灭菌法 | 玻璃器皿、 金属工具 | |||
高压蒸汽 灭菌法 | 培养基及容 器的灭菌 |
