Question

【题目】图1表示含有目的基因D的DNA片段和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列．现有MspⅠ、

BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点，分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．请回答下列问题：

（1）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个脱氧核苷酸之间由 （填化学键名称）连接．

（2）若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，产生的末端是 末端，其产物长度为 ．

（3）若图1中虚线方框内的碱基对被T﹣A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d．从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有 种不同的DNA片段．

（4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是 ．在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加了 的培养基进行培养．经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是 ．

Answer 1

【答案】（1）磷酸二酯键

（2）平 537bp、790bp、661bp

（3）4

（4）BamH I 抗生素B 同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向连接

【解析】

试题分析：（1）一条脱氧核苷酸链中相邻两个脱氧核苷酸之间由磷酸二酯键连接．

（2）SmaⅠ识别的序列为GGGCCC，切割会产生平末端；图1中DNA片段含有两个SmaⅠ识别位点，第一个识别位点在左端534 bp序列向右三个碱基对的位置；第二个识别位点在右端658bp序列向左三个碱基的位置，从而两个位点切割后产生的DNA片段的长度分布为534+3，796﹣3﹣3，658+3，即得到的DNA片段长度为537、790、661．

（3）在杂合子体内含有基因D和基因d，基因D的序列中含有两个识别位点，经过SmaI完全切割会产生537bp、790bp和661bp三种不同长度的片段，基因d的序列中含有一个识别位点，经过切割后会产生1327bp和661bp两种长度的片段，综上，杂合子中分离到该基因的DNA片段经过切割后会产生4种不同长度的片段．

（4）能够获取目的基因并切开质粒的限制酶有识别序列为GGATCC的BamH I和识别序列为GATC的MboI，若使用Mbo I会同时破坏质粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，所以要用BamH I来切割目的基因和质粒，切割后保留了完整的抗生素B抗性基因，便于筛选出含有重组质粒的大肠杆菌．因为目的基因和运载体是用同种限制酶切割的，目的基因两端的末端和质粒切割后的两个末端都能进行互补，可能出现目的基因反向连接在运载体上的情况，导致基因D不能正确表达．

故答案为：（1）磷酸二酯键

（2）平 537bp、790bp、661bp

（3）4

（4）BamH I 抗生素B 同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向连接