Question

【题目】为扩大耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了水稻新品系。图1为几种限制酶识别序列及其切割位点，图2为耐盐基因的部分序列，图3、图4中箭头表示相关限制酶的酶切位点。

（1）图4中限制性核酸内切酶作用于图2中的________(填“a”或“b”)处，其特异性表现为_______。如同时用EcoRⅠ和HindⅢ酶切外源DNA，若在每个DNA分子上至少有1个酶切位点被该酶切断，则从理论上讲，经该酶酶切后，这些线性DNA分子最多能产生长度不同的DNA片段种类数是______________。

（2）构建重组质粒时，如同时使用EcoRⅠ和HindⅢ酶，则可以形成__________种重组质粒。

（3）由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用_________技术，该技术的核心是______________。

（4）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的____________作探针进行分子杂交检测，又要用_____________方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。

Answer 1

【答案】 a 特异性的识别并切割DNA(识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开） 9 2 植物组织培养 脱分化(去分化）再分化 耐盐基因(目的基因） 一定浓度盐水浇灌(移栽到盐碱地中）

【解析】试题分析：分析图1：图1为几种限制酶识别序列及其切割位点。分析图2：图2为耐盐基因的部分序列，其中a是磷酸二酯键，b是氢键。分析图3：图3表示质粒的结构示意图，其中箭头表示相关限制酶的酶切位点。在质粒上存在SmaI、EcoRI、HindⅢ和BamHI等四个酶切位点，但是SmaI的切割位点就在抗生素抗性基因上，该基因为载体的标记基因，因此不可用该酶切割。分析图4：图4表示含有目的基因的外源DNA分子，其中箭头表示相关限制酶的酶切位点。在目的基因上，SmaI、EcoRI、HindⅢ和BamHI四种酶也存在酶切位点，但是SmaI酶的切割位点在目的基因中间序列，该酶切割不能获得完整的基因。

（1）限制酶的作用位点是磷酸二酯键，即图2中a处；限制酶具有特异性，即特异性的识别并切割DNA。如同时用EcoRⅠ和HindⅢ酶切外源DNA，若在每个DNA分子上至少有1个酶切位点被该酶切断，则从理论上讲，经该酶酶切后，这些线性DNA分子最多能产生长度不同的DNA片段种类数是9（若只切开左侧的EcoRⅠ酶的切割位点，则能形成2种不同长度的DNA片段；若只切开HindⅢ酶的切割位点，则能形成2种不同长度的DNA片段；若只切开右侧的EcoRⅠ酶的切割位点，则能形成2种不同长度的DNA片段；若只切开左侧EcoRⅠ酶和HindⅢ酶的切割位点，则能形成3种不同长度的DNA片段，其中有2种长度之前已经出现过；若只切开右侧EcoRⅠ酶和HindⅢ酶的切割位点，则能形成3种不同长度的DNA片段，其中有2种长度之前已经出现过；若只切开左侧EcoRⅠ酶和右侧EcoRⅠ酶的切割位点，则能形成3种不同长度的DNA片段，其中有2种长度之前已经出现过）。

（2）构建重组质粒时，如同时使用EcoRⅠ和HindⅢ酶，则可以形成2种重组质粒（一种含有目的基因，另一种不含目的基因）。

（3）将导入目的基因的水稻细胞培养成植株还需要利用植物组织培养技术，该技术的核心是脱分化和再分化。

（4）探针是被标记的目的基因的单链，因此为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的耐盐基因（目的基因）作探针进行分子杂交检测，又要用一定浓度盐水浇灌（移栽到盐碱地中）方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。