题目内容
【题目】回答下列（一）、（二）小题：
（一）衢州盛产椪柑，某兴趣小组想深度开发椪柑，进行以下实验。
（1）开发桔子汁。为了提高出汁率和澄清度，可以在制作桔子汁时加入________________酶（写两种）以分解果胶。生产果胶酶可从黑曲霉或苹果青霉中提取，下列适于黑曲霉或苹果青霉扩大培养的培养基是______（A．MS培养基B．尿素固体培养基C．蛋白胨和酵母提取物培养基D．添加蔗糖的豆芽汁培养基）。由于果胶酶溶于水，不利于重复使用，可通过物理或化学方法将果胶酶固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有______的制剂。
（2）开发桔子酒。桔子在酿酒时需去果皮、去囊衣和果核，因为其中含有苦味物质，所以需要额外添加酵母菌，因为自然发酵过程中，野生型天然酵母菌主要附着在________（填桔子的结构）。用桔子汁制作桔子酒，以桔子汁为原料，加入一定比例的蔗糖目的是______。最后倒入酵母悬液，混匀，加盖；发酵开始时，由于微生物的需氧呼吸会使发酵瓶内出现______，原因是______。
（二）开发耐盐品种的椪柑，以利于沿海地区栽种。
（1）为了获得耐盐基因，可以从已知耐盐植物星星草中获取耐盐基因，也可以根据耐盐碱蛋白质的氨基酸序列出发，推测出控制合成该蛋白基因的__________________，用化学合成法合成目的基因，然后用__________________技术扩增目的基因。
（2）椪柑的转化过程：将重组Ti质粒转入农杆菌时，可以用________处理农杆菌，使重组Ti质粒易于导入；之后耐盐基因通过农杆菌转入椪柑植株的愈伤组织，Ti质粒上的_____基因可以将抗盐基因整合到椪柑染色体DNA上，通过植物组织培养，可再生出新的植株。
（3）要确认耐盐基因在椪柑植株中是否正确表达，可以检测此转基因植株中该基因的表达产物，如果检测结果呈阳性，再用__________________方法从个体水平检测植株的__________________是否得到提高。
（4）假设用得到的二倍体转基因耐盐植株自交，子代中耐盐与不耐盐株系的数量比为15：1，则可以推测有几个耐盐基因整合到了染色体上，请用图表示。（耐盐基因用A表示）
______________
【答案】果胶酶和果胶甲酯酶 D 酶活性 桔皮 提高果酒的酒精和糖的含量 负压 需氧呼吸消耗氧气，产生的二氧化碳易溶于水 核苷酸序列 PCR CaCl2（或Ca2+） 控制质粒DNA转移的 一定浓度的盐水浇灌 耐盐性 
【解析】
1、果胶是植物细胞壁的主要成分，由半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯组成，果胶酶和果胶甲酯酶可水解果胶。
2、MS培养基用于植物组织培养；尿素固体培养基用于分离以尿素为氮源的微生物；蛋白胨和酵母提取物培养基用来培养细菌；添加蔗糖的豆芽汁培养基可以用于真菌的培养。
3、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因——DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA——分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质——抗原—抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
（一）
（1）水解果胶可用果胶酶和果胶甲酯酶。黑曲霉、苹果青霉为真菌，培养真菌用添加蔗糖的豆芽汁培养基。通过物理或化学方法将果胶酶固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。
（2）自然发酵过程中，野生型天然酵母菌主要附着在桔皮。用果汁制作果酒，以果汁为原料，加入一定比例的蔗糖，目的可通过微生物发酵提高果酒的酒精和糖的含量。发酵瓶内微生物需氧呼吸作用消耗氧气，产生的二氧化碳溶于水，导致瓶内出现负压。
（二）
（1）为了获得耐盐基因，可以根据耐盐碱蛋白质的氨基酸序列预测出对应mRNA上核糖核苷酸序列，进一步推测出对应的基因上的脱氧核苷酸序列。用化学合成法合成目的基因，然后用PCR技术扩增目的基因。
（2）将重组Ti质粒转入农杆菌时，可以用CaCl2（或Ca2+）溶液处理农杆菌使之成为感受态细胞，易于重组Ti质粒导入。Ti质粒上的控制质粒DNA转移的基因可以将抗盐基因整合到椪柑染色体DNA上。
（3）要确认耐盐基因在椪柑植株中是否正确表达，可以检测此转基因植株中该基因的表达产物，想从个体水平检测植株的耐盐性是否得到提高，需用一定浓度的盐水浇灌。
（4）用得到的二倍体转基因耐盐植株自交，子代中耐盐与不耐盐株系的数量比为15：1，是9:3:3:1的变形，符合基因的自由组合定律，说明耐盐基因整合到了非同源染色体上，如图所示：
。
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