题目内容
将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。
表1引物对序列表
| 引物对A | P1 AACTGAAATGTAGCTATC P2 TTAAGTCCATTACTCTAG |
| 引物对B | S1 GTCCGACTAGTGGCTGTG S2 AGCTGGCGTTTAGCCTCG |
表2 几种限制性内切酶识别序列及切割位点表
| 限制性内切酶 | Alu Ⅰ | EcoR Ⅰ | Pst Ⅰ | Sma Ⅰ |
| 切割位点 | AG↓CT TC↑GA | G↓AATTC CTTAA↑G | CTGCA↓G G↑ACGTC | CCC↓GGG GGG↑CCC |
请根据以上图表回答下列问题。
(1)在采用常规PCR技术扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是________________________________________________________________________。
(2)PCR过程中退火(复性)温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列，图2为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？________________________________________________________________________。
(3)图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？
__________________。
(4)为将外源基因转入马铃薯，图1步骤⑥转基因所用的细菌B通常为________。
(5)对符合设计要求的重组质粒T进行酶切，假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。
①采用EcoRI和Pst I酶切，得到________种DNA片段。
②采用EcoRI和SmaI酶切，得到________种DNA片段。
(1)耐高温 (2)引物对B (3)否 (4)农杆菌 (5)①2 ②1
(1)PCR技术扩增目的基因的过程中使用的DNA聚合酶是热稳定性DNA聚合酶，其特点是耐高温。
(2)分析表1可知，引物对A中AT数量明显多于GC，引物对B中GC数量明显多于AT，因此引物对B与模板结合更稳定。连接GC对的是三个氢键，连接AT对的是两个氢键。引物对A中AT多，引物对B中GC多，引物对B与模板链之间形成的GC碱基对也多，打开碱基对时，引物对B比引物对A消耗的能量多，因而需要较高的退火温度。
(3)DNA连接酶没有特异性。
(4)将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法。
(5)分析图1和表2，我们可获得下列信息：抗原基因DNA经①过程，被EcoR I切割得一黏性末端(X端)，被Alu I切割得一平末端(Y端)。载体质粒DNA分子经②过程，被EcoR I切割得一黏性末端(M端)，被Sma I切割得一平末端(N端)。经过程③，目的基因与载体DNA连接在一起，要注意的是X端与M端结合后，其碱基序列仍为EcoR I的识别序列，Y与N端结合后，其碱基序列既不是Alu I的识别序列，也不是Sma I的识别序列。在M、N之间有一个Pst I的切割位点。也就是说，重组质粒T中有EcoR I和Pst I两种酶的切割位点，而没有 Sma I和Alu I的切割位点。因而采用EcoR I和Pst I酶切，可得到两种DNA片段，采用EcoR I和Sma I酶切，只得到一种DNA片段。
