Question

17．河北农科院的科学家通过基因工程培育抗虫棉时，需要从苏云金芽孢杆菌中提取出抗虫基因，“放入”棉花的细胞中与棉花的DNA结合起来并发挥作用，请回答下列有关问题：
（1）从苏云金芽孢杆菌中切割抗虫基因所用的工具是限制性核酸内切酶，此工具主要存在于微生物中，其特点是能识别特定的脱氧核苷酸序列并在特定位点切断DNA．
（2）苏云金芽孢杆菌一个DNA分子上有许多基因，获得抗虫基因常采用的方法是“鸟枪法”．具体做法是：用限制性核酸内切酶将苏云金芽孢杆菌的DNA切成许多片段，然后将这些片段分别与运载体结合，再通过运载体转入不同的受体细胞，让它们在各个受体细胞中大量复制，从中找出含有目的基因的细胞，再用一定的方法把带有目的基因的DNA片段分离出来．
（3）进行基因工程操作一般要经过的四个步骤依次是提取目的基因、目的基因与运载体结合、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测和表达．

Answer 1

分析 1、关于限制酶，考生可以从以下几方面把握：
（1）来源：主要从原核生物中分离纯化出来．
（2）特异性：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂．
（3）结果：形成黏性末端或平末端．
2、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）获取目的基因的工具是限制酶，其主要存在于微生物中，特点是能识别特定的脱氧核苷酸序列并在特定位点切断DNA．
（2）苏云金芽孢杆菌一个DNA分子上有许多基因，获得抗虫基因常采用的方法是“鸟枪法”．具体做法是：用限制性核酸内切酶将苏云金芽孢杆菌的DNA切成许多片段，然后将这些片段分别与运载体结合，再通过运载体转入不同的受体细胞，让它们在各个受体细胞中大量复制，从中找出含有目的基因的细胞，再用一定的方法把带有目的基因的DNA片段分离出来．
（3）进行基因工程操作一般要经过的四个步骤依次是：提取目的基因、目的基因与运载体结合、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测和表达．
故答案为：
（1）限制性核酸内切酶   微生物    能识别特定的脱氧核苷酸序列并在特定位点切断DNA
（2）鸟枪法    分别与运载体结合    带有目的基因的DNA片段
（3）提取目的基因    目的基因与运载体结合  将目的基因导入受体细胞    目的基因的检测和表达

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节问题；识记基因工程的操作工具及其特点，能结合所学的知识准确答题．