题目内容
【题目】回答下列有关微生物的问题。
苯酚（C6H5OH）是广泛存在于化工行业废水中的一种污染物。为了分离和纯化高效分解苯酚的细菌。科研人员进行了下图所示的相关试验。（实验中的LB培养基能使菌种成倍增加）
（1）该实验需要用到的实验仪器有：锥形瓶、培养皿、_________________（写出2种即可，但必须是微生物培养专用）。
（2）理论上，步骤②中的LB培养基含有的营养物质除了碳源外，还有__________等。
A. 氮源 B. 激素 C. 酶 D. 生长因子 E.伊红美蓝
（3）步骤③培养基成分中的苯酚作为细菌培养唯一的____________；步骤③和④中的培养基最主要的成分差异是后者添加了____________。步骤②、③、④的培养基必须经过灭菌，其具体要求是____________。
（4）经步骤④培养后的菌落如图，则接种时甲、乙、丙三个区域的操作顺序是____________。多次划线后，最终可以得到由一个细胞繁殖而来的____________。
（5）步骤④的目的是____________；经过步骤⑤培养后，应该从残余苯酚浓度___________的培养瓶中再分离、再培养目的菌株。
【答案】高压灭菌锅、超净工作台、接种环（针） A、D 碳源 琼脂 121℃，1.05kg/cm2，15~30分钟 甲--乙--丙 单个菌落 分离纯化 最低
【解析】
从土壤中分离微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株；微生物的营养物质有5类，分别是水、无机盐、碳源、氮源及特殊生长因子；筛选菌株的过程要使用选择培养基，操作过程中要注意无菌操作；常用的固体培养基上接种方法主要有平板划线法和稀释涂布平板法，微生物计数可用稀释涂布平板法和血球计数板计数法；灭菌的方法主要有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。
（1）微生物分离实验的过程中常用的仪器有锥形瓶、培养皿、高压灭菌锅、超净工作台、接种环（针）等。
（2）步骤②中的LB培养基中必须添加的微生物的营养物质有5类，分别是水、无机盐、碳源、氮源及特殊生长因子，故选AD。
（3）该实验中，苯酚作为细菌培养唯一的碳源；步骤③和④中的培养基分别是液体培养基和固体培养基，因此两者最主要的成分差异是后者添加了琼脂；步骤②、③、④的培养基需用高压蒸汽灭菌，其具体要求是121℃，1.05kg/cm2，15～30分钟。
（4）利用平板划线法接种时，随着划线次数的增加，细菌数目逐渐减少，因此图中划线顺序应为甲→乙→丙，最终可以得到由一个细胞繁殖而来的单个菌落。
（5）步骤④的目的是分离纯化；经过步骤⑤培养后，应该从残余苯酚浓度最低的培养瓶中再分离、再培养目的菌株。
【题目】目前，临床上癌症治疗的方法一般是先通过手术切除肿瘤，为杀死体内残留的癌细胞，在手术后进行化疗。有同学从资料上获知：二氯二乙胺能够阻止参与DNA复制的酶与DNA相互作用。由此推测：二氯二乙胺能抑制癌细胞的增殖，可作为一种癌症的化疗药物，并就此问题设计实验进行了探究。
实验材料：肝部长有肿瘤的小鼠，二氯二乙胺溶液，蒸馏水，生理盐水，含有全部营养物质的细胞培养液，显微镜，细胞计数板，试管，吸管等。
（1）下面为一学生设计的实验内容，请根据科学探究要求把实验设计补充完整。实验操作如下：
①取洁净的培养皿一个，加入适量的培养液；从小鼠肝部切取肿瘤组织并将其剪碎，利用_____酶液处理，使细胞分散开，置于培养皿中培养。
②__________________________________。
③从培养皿中吸取等量的培养液置于各试管中，振荡后，在适宜温度下培养一段时间。
④从摇匀的各支试管中吸取适量的培养液置于细胞计数板内，在低倍显微镜下观察计数板三次，记录数据如下。
实验组别 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | |
二氯二乙胺浓度(mg/mL) | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0 | |
细胞数目（个/mL） | 计数板1 | 318 | 271 | 181 | 89 | 561 |
计数板2 | 319 | 272 | 183 | 93 | 563 | |
计数板3 | 323 | 267 | 176 | 88 | 556 | |
处理方法：____________________ | ___ | ____ | ____ | ___ | ____ | |
⑤根据表中所测数据，处理后在方框中用直方图直观地呈现：
__________
（2）上述细胞培养液中必需包含细胞生长的营养物质，如：________________等。
（3）①在该实验中，遵循了实验设计的____________原则和____________原则。
②根据实验结果，你能得出的结论是：
第一，________________________________；第二，________________。
