题目内容
【题目】苏云金杆菌（Bt）能产生具有杀虫能力的毒素蛋白。下图是转Bt毒素蛋白基因（A基因）植物的培育过程示意图据图回答下列问题。
（1）可利用_____________技术获得并扩增A基因。如果开始的A基因只有一个，第n次循环需要引物_____________对，引物的设计依据是___________________________。
（2）若选用双酶切构建重组质粒，可选择限制酶_______________对目的基因片段进行切割，选择对_________________质粒进行切割。
（3）目的基因插入质粒后，不能影响质粒的________________，重组大肠杆菌可通过涂布有氨苄青霉素的培养基筛选出是因为__________________。
（4）③过程中目的基因A需插入Ti质粒的_______________中，原因是_______________。
（5）生产上常将上述转基因作物与非转基因作物混合播种，其目的是______________。
【答案】PCR 2n-1 目的基因两侧的核苷酸序列 EcoRI和BglII EcoRI和BamHI 复制 （重组）质粒中（转化成功的大肠杆菌）含有氨苄青霉素抗性基因，未转化的大肠杆菌不含有该基因 T-DNA T-DNA可转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上 降低害虫种群中的抗性基因频率的增长速度
【解析】
分析题图：图示表示转Bt毒素蛋白基因植物的培育过程，其中②表示基因表达载体的构建过程；③表示采用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞的过程；④表示目的基因的表达。
（1）扩增目的基因可采用PCR技术。扩增（n-1）次一共有2n-1个DNA分子，共有模板链2n-1×2条，因此第n次循环也需要引物2n-1×2条，共2n-1对，引物的设计是根据目的基因两侧的核苷酸序列进行设计。
（2）若选用双酶切构建重组质粒，避免目的基因和质粒的自身环化，也避免目的基因和质粒反向链接，则如图所示，可采用限制酶EcoRI和BglII切割目的基因，选择EcoRI和BamHI对质粒进行切割。
（3）质粒要能进行复制才能得到更多的表达产物，所以构建基因表达载体后，不能影响质粒的复制。由于（重组）质粒中（转化成功的大肠杆菌）含有氨苄青霉素抗性基因，未转化的大肠杆菌不含有该基因，故可用涂布有氨苄青霉素的培养基筛选出重组大肠杆菌。
（4）将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法，③过程中目的基因A需插入Ti质粒的T-DNA，因为T-DNA可转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。
（5）转基因与非转基因作物混种，可降低抗性作物对害虫的选择性，使害虫种群中的抗性基因频率增长率减慢。
