Question

19．绞股蓝细胞中含有抗烟草花叶病毒（TMV）基因，可以合成一种抗TMV蛋白，叶片对TMV具有抗感染性．烟草是重要的经济作物，由于TMV的感染会导致大幅度减产．研究人员利用转基因技术培育出了抗TMV的烟草，主要流程如图所示，请据图回答下列问题．

（1）科学家首先从绞股蓝细胞中提取抗TMV基因转录的RNA，然后合成目的基因．图中过程①表示反转录，获得的DNA必须在两侧添加启动子和终止子，还要添加限制性核酸内切酶能识别切割的碱基序列．
（2）由图分析，在过程③构建的重组Ti质粒上应该含有的标记基因是卡那霉素抗性基因，重组Ti质粒导入烟草体细胞的方法是农杆菌转化法．
（3）在过程⑤培养基中需要添加卡那霉素、植物必需的各种营养成分和植物激素，以保证受体细胞能培养成再生植株．其中过程⑤添加卡那霉素的作用是筛选含有目的基因的重组质粒．
（4）在个体水平的鉴定过程中，可通过接种烟草花叶病毒的方法来确定植株是否具有抗性．

Answer 1

分析 由图可知，①是逆转录过程，③是构建基因表达载体，④是将目的基因导入受体细胞．⑤是目的基因的检测与鉴定，⑥是植物组织培养过程，据此答题．

解答 解：（1）过程①表示获得的目的基因，是RNA通过逆转录获得DNA，该DNA两侧应含有相关限制酶的酶切位点，两端还必须有启动子和终止子．
（2）由图分析，⑤过程在含有卡那霉素的培养基上培养，说明构建的重组质粒上含有的标记基因是卡那霉素抗性基因．目的基因导入植物体细胞的方法常用农杆菌转化法．
（3）过程⑤添加卡那霉素的作用是筛选含有目的基因的重组质粒．
（4）过程⑥需要对表达的产生进行鉴定，可采取抗原-抗体杂交，若从个体水平鉴定，可通过接种烟草花叶病毒的方法来确定植株是否具有抗性．
故答案为：
（1）反转录 启动子 限制性核酸内切
（2）卡那霉素抗性 农杆菌转化法
（3）筛选含有目的基因的重组质粒
（4）接种烟草花叶病毒

点评 本题考查基因工程和植物组织培养，理解基因工程培育转基因植物过程是解题的关键．