题目内容
【题目】某研究所以马尾藻岩藻聚糖(SF)为研究对象，体外培养小鼠肉瘤细胞S180，做抗肿瘤活性实验的研究。下列为部分实验步骤与结果。
实验步骤：
①将S-180肿瘤细胞以RPMI-1640为培养液(含小牛血清、青霉素和链霉素)，在5%CO2培养箱中培养。
②将上述培养过的S-180肿瘤细胞经酶消化，按1×103～1×105个·mL－1接种到96孔培养板，适宜条件下培养24h、48h、72h、96h后，以MTT法(又称比色法，一种检测细胞存活和生长的方法)于波长490 nm处测定OD值，结果如下(图1)。
③在适宜的培养条件和恰当的S-180肿瘤细胞接种浓度下，研究不同浓度(0mg·mL－1、0．1mg·mL－1、0．5mg·mL－1、1mg·mL－1、2mg·mL－1、4mg·mL－1、8mg·mL－1、10mg·mL－1、15mg·mL－1、20mg·mL－1、25mg·mL－1、30 mg·mL－1)的SF对S-180肿瘤细胞增殖的抑制情况，96 h后以MTT法于波长490 nm 处测定OD值，结果如下(图2)。实验结果：
请回答下列问题：
（1）步骤①中以RPMI-1640为培养液培养S-180肿瘤细胞的原理是________。添加一定量小牛血清的目的是____________________________。
（2）步骤②中“消化”所使用的酶是________，为减少OD值测定的误差，应注意________________。
（3）已知在一定细胞数目范围内，MTT法测得的OD值与活细胞数量呈正相关，由图1可知步骤③中恰当的S-180肿瘤细胞接种浓度为____________。
（4）图2实验结果表明，在一定范围内SF浓度与细胞增殖的抑制作用呈________(选填正相关 或 负相关)，当SF浓度达到________时细胞增殖的抑制作用达到极限，继续增加SF浓度对细胞增殖的抑制作用变化不明显。
（5）除SF浓度外，还有其他因素会影响SF抑制S-180肿瘤细胞的增殖，请你就此提出相关研究课题(只要求写出课题名称)：____________________________。
【答案】细胞增殖 其中含有一些促进细胞生长和增殖的营养物质 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 多次测量，算平均值 5×103个·mL-1 正相关 25mg·mL-1 探究SF处理时间与S-180肿瘤细胞的增殖抑制关系（或探究SF分子大小与S-180肿瘤细胞的增殖抑制关系）
【解析】
（1）动物细胞培养，原理：细胞增殖；动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养；动物细胞培养需要满足以下条件：①无菌、无毒的环境：培养液和培养用具应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，以便清除代谢产物防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害。②营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。在使用合成培养基时通常需加入血清、血浆等一些天然成分。③温度和PH④气体环境：细胞所需的气体主要是O2和CO2。（2）根据题干信息，在一定细胞数目范围内，MTT法测得的OD值与活细胞数量呈正相关，图2表示S-180肿瘤细胞在不同浓度SF作用下生长曲线，SF浓度越大OD值越小，肿瘤细胞的数量越少，说明SF抑制肿瘤细胞的增殖。
（1）动物细胞培养的原理是细胞增殖。添加一定量血清的目的是补充动物细胞培养所需的营养物质。
（2）在动物细胞培养的过程中，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶将组织分散成单个细胞，步骤②中“消化”所使用的酶是胰蛋白酶或胶原蛋白酶，目的是为了获得细胞悬液。在实验中求平均值可以减少实验误差，所以为减少OD值测定的误差，应注意多次测量算平均值。
（3）在一定细胞数目范围内，MTT法测得的OD值与活细胞数量呈正相关，所以由图1可知步骤③中恰当的S-180肿瘤细胞接种浓度为5×103个·mL-1。
（4）图2实验结果表明，在定范围内，SF浓度与细胞增殖的抑制作用呈正相关，当SF浓度达到25mg·mL-1时细胞增殖的抑制作用达到极限，继续增加SF浓度对细胞增殖的抑制作用变化不明显。
（5）本小题考查的是学生对再探究的认知程度，属于开放性试题，只要答得有道理即可给分，例如可以探究SF处理时间与S-180肿瘤细胞的增殖抑制关系（或探究SF分子大小与S-180肿瘤细胞的增殖抑制关系）。
