题目内容
【题目】植物细胞壁中存在大量不能被猪消化的多聚糖类物质，如半纤维素多聚糖、果胶质（富含有半乳 糖醛酸的多聚糖）等。研究人员通过基因工程、胚胎工程等技术培育出转多聚糖酶基因（manA）猪，主要流程如下 图（neo 为新霉素抗性基因）。
（1）将该重组质粒成功导入受体细胞后，经培养，发现约有 50%的细胞能正常表达目的基因产物，原因 是_____________________________________________________________。通过①过程获得的重组质粒含有 4.9 kb 个碱基对，其中 manA 基因含有 1.8 kb 个碱基对。若用 BamH Ⅰ和 EcoR Ⅰ联合酶切割其中一种重组质粒，只能获得 1.7 kb 和 3.2 kb 两种 DNA 片段，若用上述联合酶切割同等长度的另一种重组质粒，则可获得__________kb 长度两种的 DNA 片段。
（2）图 2 中，猪胎儿成纤维细胞一般选择传代培养 10 代以内的细胞，原因是__________________________________，猪 的卵母细胞一般要培养到__________期。
（3）在④过程的早期胚胎培养时，通常需要定期更换培养液，目的是______________________________________________，一 般培养到__________阶段，可向受体移植。
（4）⑤过程前，通常需对受体母猪注射孕激素，对其进行__________处理。
【答案】目的基因与质粒结合时，存在正接和反接两种重组质粒 3.5和1.4 保持正常的二倍体核型 减数第二次分裂中 清除代谢废物，补充营养物质 桑椹胚或囊胚 同期发情
【解析】
分析题图：①为基因表达载体的构建、②为将目的基因导入受体细胞、③为体细胞核移植、④为早期胚胎培养、⑤为胚胎移植。
（1）将该重组质粒成功导入受体细胞后，经培养，发现约有50%的细胞能正常表达目的基因产物，原因是目的基因与质粒结合时，存在正接和反接两种重组质粒。上述4.9kb的重组质粒有两种形式，若用BamHI和EcoRI联合酶切其中一种，只能获得1.7kb和3.2kb两种DNA片段，说明右侧BamHI和EcoRI之间的长度为1.7；用联合酶切同等长度的另一种重组质粒，则切割的是BamHI左侧的位点，又因为manA基因含有1.8kb个碱基对，可获得1.7+1.8=3.5kb和4.9-3.5=1.4kb两种DNA片段。
（2）猪胎儿成纤维细胞一般选择传代培养10代以内的细胞，原因是保持正常的二倍体核型。细胞在传至10～50代时，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，这时部分细胞的细胞核型可能会发生变化。在核移植时采集的卵母细胞，在体外培养到减数第二次分裂中期才进行去核操作。
（3）在早期胚胎培养过程中，应定期更换培养液，清除代谢废物，补充营养物质。胚胎一般培养到桑椹胚或囊胚阶段，可向受体移植。
（4）胚胎移植前，通常需对受体母猪注射孕激素，使其能同期发情。
