题目内容
2007年的诺贝尔生理学或医学奖授予在“基因靶向”技术方面作出突出贡献的三位科学家。“基因靶向”技术,是指应用DNA同源重组原理,通过一定的载体,用设计好的目的基因替代靶基因,从而达到使靶基因功能丧失的目的。借助这一技术,科学家用小鼠进行实验,使其体内的某项特定基因丧失功能,以帮助人们找到治疗疾病的有效方法。下面是该实验的基本过程,请回答有关问题:
(1)获得胚胎干细胞(ES细胞):实验一般采用ES细胞作为目的基因的受体细胞,这是因为ES细胞具有发育的______________。举出一例获取ES细胞的常用方法:___________________________________________________________________________________________________。
(2)获取目的基因:
①目的基因是靶基因的同源片段,经过修饰使靶基因的功能改变或丧失,就可获得目的基因。
②为了提高实验成功率,需要通过PCR技术获得目的基因的大量拷贝。与体内DNA复制相比,PCR反应体系需加入哪两种特别的物质:_______________________________________________________________和_________________________________。
(3)构建基因表达载体是基因工程的____________,质粒是具有自我复制能力的双链环状DNA,它所具有的一至多个____________________________位点,使目的基因插入其中成为可能,因此常被选作运载体。
(4)将基因表达载体导入ES细胞,从中筛选出成功发生了同源重组的ES细胞,然后培育出小鼠。
①由ES细胞培育出小鼠的过程中,需要采用哪些技术手段?____________________。
②通过检测目的基因是否表达出蛋白质产品,可以确定该小鼠体内是否成功发生了基因的同源重组。请简述这种检测方法。___________________________________________。
(1)全能性 从早期胚胎(囊胚内细胞团)中分离(从胎儿的原始性腺中分离:通过核移植技术培育得到)
(2)两种引物 热稳定DNA聚合酶
(3)核心 限制酶切割
(4)①早期胚胎培养技术和胚胎移植技术 ②提取蛋白质,用相应的抗体进行抗原——抗体杂交