Question

【题目】尿素［CO(NH2)2］是一种重要的农业氮肥。但尿素并不能直接被农作物吸收，只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。某生物兵趣小组欲分离土壤中分解尿素的细菌，

设计了如下实验流程：

土壤取样→选择培养→梯度稀释→涂布培养→计数与鉴定

请回答相关问题：

（1）涂布培养前需要梯度稀释，其目的是____，如果得到了2个或2个以上菌落数目在____之间的平板，则说明稀释操作比较成功。

（2）选择培养过程能够“浓缩”尿素分解菌是因为其培养基____

（3）取1g土壤，按下图稀释后，在三个平板上分别接入0.1ml稀释液后，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别是52, 50和48。据此可计算出每克土样中的活菌数为___，该数值与活菌的实际数目相比____（偏高／偏低），原因是：____

（4）在培养基上滴加酚红指示剂可以鉴定其上细菌能否分解尿素，其原理是____

Answer 1

【答案】将聚在一起的微生物分散成单个细胞，从而在培养基上形成单个菌落（或培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌） 30—300 以尿素作为唯一氮源 5.0107个 偏低 因为两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 分解尿素的细菌能(合成脲酶)将尿素分解成氨，使培养基碱性增强，酚酞指示剂变红

【解析】

统计菌落数目的方法
（1）显微镜直接计数法
①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法：用计数板计数； ③缺点：不能区分死菌与活菌。
（2）间接计数法（活菌计数法）
①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
②操作
a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性。
b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。
③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。

（1）涂布培养前需要梯度稀释，其目的是将聚在一起的微生物分散成单个细胞，从而在培养基上形成单个菌落；如果得到了2个或2个以上菌落数目在30-300之间的平板，则说明稀释操作比较成功。
（2）选择培养过程能够“浓缩”尿素分解菌是因为其培养基以尿素作为唯一氮源，只有能够分解尿素的微生物可以在此培养基上生长，而其它不能以尿素作为氮源的则会因为缺少氮源而不能生长。
（3）取1g土壤，按如图稀释后，在三个平板上分别接入0.1ml稀释液后，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别是52，50和48。据此可计算出每克土样中的活菌数为×100=5.0×107个；由于两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此该数值与活菌的实际数目相比偏低。
（4）鉴定尿素分解菌的原理是分解尿素的细菌能合成脲酶，脲酶将尿素分解成氨，使培养基碱性增强，酚酞指示剂变红。