Question

【题目】凝乳酶能够使乳汁中的蛋白质凝聚形成奶酪，主要来源为未断奶的小牛胃粘膜。随着社会发展，传统来源的凝乳酶已不能满足生产需要。研究人员利用PCR技术扩增了目的基因，并培育了能合成凝乳酶的转基因酵母菌，从而获得足够的凝乳酶。回答下列问题：

(1)利用PCR技术扩增目的基因的前提条件是要有____________用来合成引物。PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液(含ATP和Mg2+)、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、引物和_____________。

(2)凝乳酶基因可从构建的凝乳酶基因组文库中获取，也可以从其cDNA文库中获取，从前者获取的凝乳酶基因__________（填“含有”或“不含有”）启动子。

(3)利用PCR技术扩增目的基因后需要构建基因表达载体，其目的是___________。

(4)构建基因表达载体过程中需要用__________（酶）处理。目的基因转录过程中，__________能使转录在所需要的地方停止下来。

(5)分子水平上检测目的基因是否成功导入酵母菌的方法是___________________。

(6)工业生产过程中，使用酵母菌作为受体，而不选用大肠杆菌的原因是_______。

Answer 1

【答案】一段已知目的基因的核苷酸序列 Taq酶（Taq 酶、热稳定性 DNA 聚合酶） 含有 使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用 限制酶（或限制性核酸内切酶）和DNA连接酶 终止子 DNA分子杂交 大肠杆菌不含内质网和高尔基体，不能对蛋白质进行加工和修饰

【解析】

本题考查基因工程，考查对基因工程操作程序的理解和识记。可在熟记基因工程四个步骤相关知识的基础上进行作答。

(1)利用PCR技术扩增目的基因，需要知道目的基因两端的部分序列，以便于合成引物。PCR反应体系中除含有扩增缓冲液、4种原料、模板DNA、引物外，还应含有Taq酶（或热稳定性 DNA 聚合酶）。

(2)基因组文库是将供体DNA切成大小不同的片段，然后导入受体菌中保存而获得，其中含有启动子。

(3)基因表达载体包括启动子、目的基因、终止子、复制原点等原件，可以使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。

(4)构建基因表达载体过程中需要用同种限制酶切割目的基因和载体，以形成相同的黏性末端，然后再用DNA连接酶进行连接。目的基因转录过程中，终止子位于目的基因的下游，能使转录在所需要的地方停止下来。

(5)分子水平上检测目的基因是否成功导入酵母菌，可以用标记的目的基因单链作为探针，与酵母菌中的DNA进行DNA分子杂交。

(6) 凝乳酶来源于真核生物，分泌过程中经过了内质网、高尔基体的加工，大肠杆菌不含内质网和高尔基体，不能对核糖体合成的肽链进行加工和修饰，因此工业生产过程中，使用酵母菌作为受体，而不选用大肠杆菌。