Question

【题目】自生固氮菌可不与其它植物共生，能独立完成固氮作用，在农业生产中具有广泛的用途。研究人员从土壤中筛选高效的自生固氮菌株，并对其固氮能力进行了研究。请回答下列问题：

（1）在配制含琼脂的培养基和倒平板的过程中，下列选项不需要的是________（填序号）

①酒精灯 ②接种环 ③高压蒸汽灭菌锅 ④棉塞

（2）要从土壤样品中分离出自生固氮菌，在获得土壤浸出悬液后，可以采用稀释涂布平板法将菌液涂布于________培养基上进行筛选。

（3）在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌液量不宜过多的原因是_________________________________。

（4）涂布培养四天后，可通过观察________的形态特征来统计土壤中自身固氮菌的种类。

（5）为了进一步筛选高效固氮菌，研究人员将上述获得的等量的四种固氮菌分别接种到等量的液体培养基中进行振荡培养相同时间后，对固氮菌进行计数并测定培养液中的含氮量，结果如下表：

甲菌乙菌丙菌丁菌

菌量（个/mL）2.1×1052.5×1051.8×1052.0×105

含氮量（K）3.324.385.345.32

①培养过程中需不断振荡的目的是__________________________________________________。

②可以采用________方法对固氮菌进行计数，假设计数室长和宽均为1mm，深0.1 mm，每个小方格中平均有7个固氮菌，则10mL培养液中有固氮菌的数量为________个；如果小方格中固氮菌的数量太多，无法数清，则应________。

③由上述结果可知，________菌的固氮效率最高。

Answer 1

【答案】

（1）②

（2）缺氮

（3）培养基表面的菌悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果 （4）菌落

（5）①让固氮菌与培养液充分接触 ②抽样检测 2.8×108 对培养液稀释后计数 ③丙

【解析】

试题分析：

（1）平板培养基配制的基本流程为：计算→称量→溶化（包括琼脂）→调节PH→灭菌（将配制好的培养基转移至锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅）→倒平板（在酒精灯火焰旁进行），上述过程不需要接种环，即②。

（2）自生固氮菌是指在土壤中能够独立进行固氮的细菌，可在缺氮培养基上生长，因此，若要从土壤样品中分离出自生固氮菌，在获得土壤浸出悬液后，可以采用稀释涂布平板法将菌液涂布于缺氮培养基上进行筛选。

（3）在涂布平板时，若滴加到培养基表面的菌悬液过多，则会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果。

（4）不同的微生物表现出不同的菌落形态特征，所以涂布培养四天后，可通过观察菌落的形态特征来统计土壤中自身固氮菌的种类。

（5）①培养过程中需不断振荡的目的是让固氮菌与培养液充分接触。

②对固氮菌进行计数，可采用抽样检测的方法。假设计数室长和宽均为1mm，深0.1 mm，每个小方格中平均有7个固氮菌，则10mL培养液中有固氮菌的数量为1mm×1mm×0.1 mm×7×10mL×400×10000 =2.8×108个；如果小方格中固氮菌的数量太多，无法数清，则应对培养液稀释后计数。

③表中信息显示：丙菌培养液中的含氮量最高，说明丙菌的固氮效率最高。