题目内容
【题目】奶牛养殖业中乳腺炎和口蹄疫分别是由细菌和病毒引起的两种严重疾病。研究者利用生物技术培育出转乳铁蛋白肽（抗细菌）和人干扰素（抗病毒）的双转基因奶牛新品种。下图1为基因表达载体，图2为培育流程。
（1）构建基因表达载体时要用到的工具酶是_______________________。图1中新青霉素抗性基因的作用是_______________________。
（2）研究者利用含有乳铁蛋白肽基因和人干扰素基因的DNA片段分别制成探针，与乳腺细胞、口腔上皮细胞、蹄部细胞等提取的RNA进行杂交:结果如下表：
探针 结果 | 乳腺细胞 | 口腔上皮细胞 | 蹄部细胞 |
乳铁蛋白肽基因探针 | 出现杂交带 | 未现杂交带 | 未现杂交带 |
人干扰素基因探针 | 出现杂交带 | 出现杂交带 | 出现杂交带 |
说明:牛乳铁蛋白肽基因只能在转基因奶牛的______________细胞中表达，人干扰素基因则可在转基因奶牛的___________细胞中表达，这与构建表达载体时___________的选择有关。
（3）图2中④是处于_______________（时期）的卵母细胞，而③一般选传代10代以内的细胞，理由是：___________________________________________________________________________。
（4）不需要对重组胚胎性别进行鉴定，理由是：____________________________________________。
【答案】 限制酶和DNA连接酶 鉴别、筛选出含有目的基因的细胞（或胚胎） 乳腺（细胞） 全身（细胞）/多种体细胞 启动子 减数第二次分裂中期（或MⅡ中期） 以保持细胞正常的二倍体核型或遗传物质未发生改变或细胞没有发生突变 牛胎儿成纤维细胞来自雄性个体，胚胎就是雄性，来自雌性个体，胚胎就是雌性
【解析】试题分析：据图分析，图1为基因表达载体，含有复制原点、启动子、终止子、目的基因（牛乳铁蛋白肽基因和人干扰素基因）、标记基因。图2 转基因奶牛的培育过程，该过程利用了动物细胞培养技术、转基因技术、核移植技术、胚胎移植技术等。
（1）基因工程过程中，构建基因表达载体时，利用的工具酶是限制酶和DNA连接酶；图1中新霉素抗性基因是标记基因，由于鉴别、筛选出含有目的基因的细胞（或胚胎）。
（2）根据表格分析，牛乳铁蛋白肽基因探针只在乳腺细胞出现了杂交带，说明该基因只能在转基因奶牛的乳腺细胞中表达；人干扰素基因探针在三种细胞都出现了杂交带，说明该基因可以在转基因奶牛的全身所有细胞中表达，这与构建表达载体时启动子的选择有关。
（3）据图分析，图2中④是核移植的受体细胞，一般是处于减数第二次分裂中期（或MⅡ中期）的卵母细胞；③是目的基因的受体细胞，一般选传代10代以内的细胞，以保持细胞正常的二倍体核型或遗传物质为发生改变或细胞没有发生突变。
（4）牛胎儿成纤维细胞来自雄性个体，胚胎就是雄性，来自雌性个体，胚胎就是雌性，因此不需要对重组胚胎性别进行鉴定。
