题目内容
【题目】回答下列（一）、（二）小题：
（一）锈去津是一种含氮的有机化合物，它是广泛使用的除草剂之一。锈去津在土壤中不易降解，为修复被其污染的土壤，按下面程序选育能降解锈去津的细菌（目的菌）。已知锈去津在水中溶解度低，含过量锈去津的固体培养基不透明。
回答下列问题：
（1）为选取能降解锈去津的细菌，应选取____土壤样品加____（A．蒸馏水 B．清水 C．生理盐水 D．无菌水）制备成土壤浸出液。
（2）本实验中将细菌接种到固体培养基所用的接种方法为____，接种后的培养皿倒置后置于____中培养一段时间后，观察菌落特征。
（3）测得A～C瓶中三类细菌的最大密度如下图所示：
由图推断，从A瓶到C瓶液体培养的目的是____并提高其密度；甲类细菌密度迅速降低的主要原因是____；
（4）图中固体培养基上，____菌落即为目的菌落。
（二）绿色荧光蛋白基因（GFP）被发现以来，一直作为一个监测完整细胞和组织内基因表达及蛋白质位置的理想标记。回答下列问题：
几种限制酶识别序列及切割位点表
（1）若图中GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是—T TCGA，N端伸出的核苷酸的碱基序列是—C TGCA，则在构建含该GFP的重组质粒A时，应选用限制酶____，对____进行切割。
（2）重组质粒A常通过 ____法导入到猪胎儿成纤维细胞。
（3）检测GFP是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上，可在荧光显微镜下观察的表达。图中绿色荧光蛋白转基因克隆猪中GFP既是____，也是____。
（4）绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程中涉及到多项现代生物技术，图中⑤⑥⑦过程属于____技术，⑨过程通常选用____个细胞以上的早期胚胎进行移植。
【答案】使用过锈去津 D 涂布接种法 恒温培养箱 筛选或选择目的菌 培养液中缺少甲类细菌可利用的氮源（或有氧条件抑制了甲类细菌的生长） 有透明带 HindⅢ和PstⅠ Ti质粒和目的基因（或Ti质粒） 显微注射 目的基因 标记基因 核移植 8
【解析】
（一）选择培养基：培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物生长。图中从A瓶到C瓶液体培养的目的是扩大培养，筛选目的菌。
（二）图中①表示目的基因获取，②表示用限制酶切割质粒，③表示基因表达载体构建，④表示将目的基因导入受体细胞，⑤表示将猪胎儿成纤维细胞提取细胞核，⑥表示将猪卵母细胞去除细胞核，⑦表示核移植，⑧表示动物细胞培养，⑨表示胚胎移植。
（一）
（1）为选取能降解锈去津的细菌，将锈去津作为唯一氮源，选取使用过锈去津土壤样品加无菌水制备成土壤浸出液。
（2）本实验中使用的是涂布接种法，接种后的培养皿倒置后置于恒温培养箱中培养。
（3）由图可知从A瓶到C瓶，甲类细菌变少，乙丙细菌增多，以此筛选目的菌并提高其密度；甲类细菌密度迅速降低的主要原因是培养液中缺少甲类细菌可利用的氮源。
（4）菌落有透明带，说明锈去津被细菌分泌的酶降解，可筛选出目的菌。
（二）
（1）从图示可知，GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是TTCGA，是限制酶HindⅢ酶的切割位点；N端伸出的核苷酸的碱基序列是CTGCA，是限制酶PstⅠ切割位点；则在构建含该GFP的重组质粒A时，应选用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割目的基因和质粒，再用DNA连接酶把目的基因和运载体相连。
（2）重组质粒A常通过显微注射法导入到猪胎儿成纤维细胞。
（3）据图可知最终要得到绿色荧光猪，因此GFP是目的基因，由于GFP能合成绿色荧光蛋白，可据此检测GFP是否成功导入细胞，作为标记基因。
（4）绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程中涉及到基因工程、核移植和胚胎移植，图中⑤⑥⑦过程属于核移植技术，⑨过程通常选用8个细胞以上的早期胚胎进行移植。
