题目内容
【题目】如图为某种质粒，小箭头所指为限制性内切酶EcoRⅠ的酶切位点，ampR为氨苄青霉素抗性基因，tetR为四环素抗性基因，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端包括EcoRⅠ在内的多种酶的酶切位点。请根据图
回答下列问题。
（1）将含有目的基因的DNA与质粒分别用EcoRⅠ酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有_________、_________、_________三种。将此三种连接产物与无任何抗药性的细菌A接种到含四环素的培养基中，能生长的细菌A所含有的连接产物是_________；若接种到含青霉素的培养基中，能生长繁殖的细菌A所含有的连接产物是_________。
（2）假设人的生长激素基因，与上述质粒构建表达载体后导入细菌B（本身不含有氨苄青霉素和四环素抗性质粒），然后接种在一个只含有氨苄青霉素的培养基上，得到如图a所示的结果（圆点表示菌落），该结果说明能够生长的细菌中已经导入了_________，反之则没有导入；再将灭菌绒布按到培养基a上，使绒布表面沾上菌落，然后将绒布按到只含有四环素的培养基上培养，得到如图b所示结果（空心圆圈表示与图a中培养基上对照没有菌落的位置）。与图b圆圈相对应的图a中的菌落表现型是_________，这些菌落则是导入了_________的工程菌。
【答案】 目的基因和质粒连接物 质粒和质粒连接物 目的基因和目的基因连接物 质粒和质粒连接物 目的基因和质粒连接物、质粒和质粒连接物 重组质粒或普通质粒 抗氨苄青霉素而不抗四环素 重组质粒
【解析】试题分析：根据题干信息和图像分析可知，图中质粒上含有限制性内切酶EcoRI酶切位点、氨苄青霉素抗性基因、四环素抗性基因、启动子、终止子、复制原点，其中两个抗性基因一般用于筛选重组质粒，并且当限制酶切割质粒时，四环素抗性基因被破坏，即失活，因此在筛选时应选择含有氨苄青霉素抗性基因而四环素抗性基因被破坏的重组质粒。
（1）用EcoRI酶切出的目的基因和质粒具有相同的黏性末端，如果放在一起加入DNA连接酶，则可出现3种连接结果，即目的基因自身连接形成的连接物，质粒自身连接形成的连接物和重组质粒（目的基因和质粒连接物）。将此三种连接产物与无任何抗药性的细菌A接种到含四环素的培养基中，由于构建基因表达载体时，四环素抗性基因被破坏，因此能生长的细菌A所含有的连接产物是质粒与质粒的连接物；若接种到含青霉素的培养基中，由于青霉素抗性基因没有被破坏，因此能生长的细菌A所含有的连接产物是目的基因与质粒的连接物、质粒与质粒的连接物。
（2）由于质粒上有2个标记基因，但抗四环素基因被插入的基因破坏掉，因此剩下的是抗氨苄青霉素抗性基因，如果在含氨苄青霉素的培养基上能生长，说明已经导入了重组质粒或普通质粒，因为普通质粒和重组质粒都含有抗氨苄青霉素的基因。与图b空圈相对应的图a中的菌落表现型是抗氨苄青霉素但不抗四环素，说明这些细菌中导入了重组质粒。
千里马走向假期期末仿真试卷寒假系列答案
