Question

【题目】在生物的生长发育过程中，基因是选择性表达的。某真核生物，要想获得极为稀少的mRNA及其克隆，可以用下图所示的差异杂交法。Poly（A)是指位于mRNA上的150-200个腺苷酸残基。请回答下列问题。

（1）利用表达目的mRNA的细胞获得放射性标志的探针时，需要用________酶，可以用_______作为引物。

（2）用羟基磷灰石柱层析法，回收______________（填“未杂交的32P标记的单链DNA”或“杂交分子”），用构建________（填“基因组”或“cDNA”）文库。

（3）在生物的生长发育过程中，由于基因选择性表达导致细胞__________，该过程的结果使多细胞生物体中的细胞趋向____________，有利于提高各种生理功能的效率。

（4）若用NaOH水解除去mRNA获得的分子与不表达目的mRNA细胞中获得的单链DNA杂交，可能形成杂合双链区和游离的单链区，原因是_________________________________________________________。

Answer 1

【答案】（1）逆转录酶 Poly （A)

（2）未杂交的32P标记的单链DNA cDNA

（3）分化 专门化

（4）DNA分子中含有内含子、非编码区等序列，mRNA分子中没有互补的碱基序列，仍然为两条游离的单链，所以出现游离单链区。DNA分子中含有外显子序列，mRNA中具有互补的碱基序列，互补碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区。

【解析】

试题分析：（1）依题意并结合图示分析可知：利用表达目的mRNA的细胞获得放射性标志的探针时，是以总Poly（A)—mRNA为模板通过反转录合成，因此需用逆转录酶。由题意“Poly （A)是指位于mRNA上的150-200个腺苷酸残基”可知，可以用Poly （A) 作为引物。

（2）图示中未杂交的32P标记的单链DNA是以目的mRNA为模板反转录合成，只含有某真核生物的部分基因，所以在构建基因文库时，用羟基磷灰石柱层析法，回收的是未杂交的32P标记的单链DNA，所构建的基因文库属于cDNA文库。

（3）在生物的生长发育过程中，由于基因选择性表达导致细胞分化。细胞分化的结果使多细胞生物体中的细胞趋向专门化，有利于提高各种生理功能的效率。

（4）DNA分子中含有内含子、非编码区等序列，mRNA分子中没有与之互补的碱基序列，仍然为两条游离的单链，所以用NaOH水解除去mRNA获得的分子与不表达目的mRNA细胞中获得的单链DNA杂交，会出现游离单链区；DNA分子中含有外显子序列，mRNA中具有与之互补的碱基序列，互补碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区，因此用NaOH水解除去mRNA获得的分子与不表达目的mRNA细胞中获得的单链DNA杂交，会形成杂合双链区。