题目内容
【题目】Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚眙干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如图（图中数字序号表示的是相关过程）。请回答:
（1）过程①将进行培养的上皮细胞注入去核的卵母细胞中，接受细胞核的卵母细胞应处于__________________时期。
（2）过程②利用的技术是____________________，当重组胚胎培养到囊胚期时，可从其_________分离出ES细胞。
（3）过程③中获取的目的基因是____________________，若要将目的基因导入受体细胞，需要构建_______________________，构建之前可以根据_______________________设计引物，利用PCR技术对目的基因进行扩增。为了检测ES细胞的DNA上是否插入了干扰素基因，可采用______________技术。
（4）按此方法和图示技术流程，完成Rag2基因缺失小鼠的基因治疗涉及的酶有___________和耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）等。通测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的蛋白质，用__________________进行杂交实验。
【答案】MⅡ中 早期胚胎培养 内细胞团 （正常的）Rag2基因 含（正常的）Rag2基因的基因表达载体 （正常的）Rag2基因的脱氧核苷酸序列（或碱基对序列或遗传信息） DNA分子杂交 限制性核酸内切酶、DNA连接酶和胰蛋白酶 抗Rag2蛋白的抗体
【解析】
题图图示是利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag 2基因缺失小鼠进行基因治疗的过程图解，其中①表示核移植过程，②表示早期胚胎培养过程，③表示采用基因工程技术将目的基因导入受体细胞。然后将改造后的受体细胞经过培养之后回输到基因缺陷小鼠体内获得治疗。
（1）MII中期的卵母细胞含有细胞核全能性表达的物质和环境条件，故接受细胞核的卵母细胞应处于MII中期，即过程①将进行培养的上皮细胞注入去核的处于MII中期的卵母细胞中。
（2）过程②利用的技术是早期胚胎培养，内细胞团将来发育成胚胎的各种组织，滋养层细胞将来发育成胎膜和胎盘，故当重组胚胎培养到囊胚期时，可从其内细胞团分离出具有全能性的ES细胞。
（3）根据题干信息可知，过程③中获取的目的基因是（正常的）Rag2基因，若要将目的基因导入受体细胞，需要构建含（正常的）Rag2基因的基因表达载体，构建之前可以根据Rag2基因的脱氧核苷酸序列（或碱基对序列或遗传信息）设计引物，利用PCR技术对目的基因进行扩增。将目的基因导入ES细胞最有效的方法是显微注射法，为了检测ES细胞的DNA上是否插入了干扰素基因，可采用DNA分子杂交技术。
（4）按此方法和图示技术流程，完成Rag2基因缺失小鼠的基因治疗涉及的技术包括基因工程、PCR技术、动物细胞培养技术，其中基因工程涉及的酶有限制性核酸内切酶、DNA连接酶，动物细胞培养技术涉及的酶有胰蛋白酶，PCR技术涉及的酶有耐高温DNA聚合酶（Taq酶）等。检测Rag2基因的表达情况，可采用抗原一抗体杂交法，即提取治疗后小鼠骨髓细胞的蛋白质，用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。
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